《表3 PCR循环条件：衰老细胞染色质开放变化的初步分析》

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《衰老细胞染色质开放变化的初步分析》

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参照文献[16]的方法，对2BS细胞进行Tn5酶切反应，主要步骤如下:取冻存于液氮中的PD26、PD55的2BS细胞进行复苏。复苏后的细胞置于T75培养瓶，采用添加10%胎牛血清、1%青霉素链霉素混合液的1640培养基培养，培养箱条件为37℃、5%CO2。当细胞长满且生长状态良好时，用胰酶将细胞消化，并使用台盼蓝染色，过滤除去死细胞后进行细胞计数，计数50 000个细胞。取计数后的细胞，在4℃条件下500 g离心5 min后弃上清；再加入50μL预冷PBS吹打洗涤，4℃条件下500 g离心5 min，弃上清；加入50μL预冷的裂解液（由10 mmol/L Tris pH 7.5、10 mmol/L NaCl、3 mmol/L MgCl2以及0.1%NP-40配置而成）悬浮细胞，在4℃条件下500 g离心10 min后弃上清。此时向细胞沉淀中加入50μL转座反应体系（表1），吹打混匀后，37℃孵育30 min。待孵育结束后使用DNA纯化试剂盒纯化DNA，纯化完成后使用10μL试剂盒中的洗脱液将其洗脱，随后进行PCR扩增。PCR反应体系如表2所示，循环条件见表3。其中，PD26对应的primer 1序列为AGGCAGAA，PD55对应的primer 1序列为TCCTGAGC；barcoded primer 2序列为AATGAT-ACGGCGACCACCGAGATCTACACTCGTCGGCA-GCGTCAGATGTG。PCR结束后，再次使用DNA纯化试剂盒纯化DNA[17]。