《表2 换锦花花色苷形成相关基因qRT-PCR所用引物》

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《基于VIGS基因沉默体系的换锦花LsMYBs基因功能研究》

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Ls：换锦花；CHS：查尔酮合成酶；CHI：查尔酮异构酶；F3H：黄烷酮3-羟化酶；F3'H：类黄酮-3'-羟化酶；DFR：二氢黄酮醇4-还原酶；ANS：花青素合酶；UFGT：类黄酮3-O-葡萄糖基转移酶；ACTIN：肌动蛋白（内参基因）；下同

提取所有换锦花花瓣总RNA，采用Prime Script RT reagent Kit Perfect Real Time（TaKaRa，大连）试剂盒反转录成cDNA作为荧光定量PCR模板。由换锦花花瓣转录组测序结果筛选出花色苷形成相关的差异结构基因：花青素合酶基因（anthocyanidin synthaes，LsANS）（Cluster-36087.186073）、查尔酮合成酶基因（chalcone synthase，LsCHS）（Cluster-36087.263163）、查尔酮异构酶基因（chalcone isomerase，LsCHI）（Cluster-36087.263163）、黄烷酮3-羟化酶基因（flavanone 3-hydroxylase，LsF3H）（Cluster-41764.0）、类黄酮-3'-羟化酶基因（flavonoid 3'-hydroxylase，LsF3'H）（Cluster-36087.263163）、二氢黄酮醇4-还原酶1基因（dihydroflavonol-4-reductase，LsD-FR1）（Cluster-36087.227184）、LsDFR3（Cluster-15746.0）和类黄酮3-o-葡萄糖基转移酶基因（flavonoid 3-o-glycosyltransferase，LsUFGT）（Cluster-36087.179931），并用Primer Premier 5.0设计荧光定量qRT-PCR引物（表2），由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。参照SYBR?Premix Ex Taq TMⅡ（Perfect Real Time）（TaKaRa，大连）方法，采用CFX96TM实时定量PCR仪（BIO-RAD，美国）检测基因表达。qRT-PCR反应体系和条件参照蒋婷婷（2015）的体系和条件，采用2-??Ct方法计算实时荧光定量qRT-PCR基因相对表达量，以LsACTIN为内参基因（蒋婷婷等，2015），3次生物学重复和3次技术重复。