《表5 PCR反应所用菌株及引物》

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《一种XRE家族转录调节因子对干酪乳杆菌适应抗生素环境的影响》

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将筛选出的含氯霉素抗性无红霉素抗性的LCZ1/LCZ2，用引物0458upF、0458downR进行验证。分别挑取5个双交换子进行PCR验证，并进行琼脂糖凝胶电泳分析，每条泳道对应的PCR产物由表5所示。由图2可以看出，L.casei Zhang-G/A-1200/600没有红霉素抗性和氯霉素抗性，所以泳道1、8、15、22均无条带；泳道9-14为氯霉素引物下的pNZ5319-0458Up-Down和LCZ1/LCZ2，应该都出现条带，可能由于特异性不好导致没有扩增出来，但不影响后续分析。因质粒本身携带有抗氯霉素与红霉素基因，因此在泳道2、16和23均有条带出现；本试验筛选阳性转化子，此过程红霉素抗性消失，因此表现为泳道2有条带，而泳道3-7无条带；由于在pNZ5319-0458Up-Down与LCZ1/LCZ2中氯霉素抗性基因片段小于L.casei Zhang-G/A-1200/600，因此pNZ5319-0458Up-Down与LCZ1/LCZ2中的全长片段要小于L.casei Zhang-G/A-1200/600，如泳道29-35所示。在pNZ5319-0458Up-Down与LCZ1/LCZ2中用upF，CatR及CatF和downR引物扩增均出现条带，如泳道16-21和23-28所示，说明Cat基因片段已连入目的基因的前后臂中。结果与预期的一致，并且测序结果显示各序列均正确。成功的筛选到LCZ1/LCZ2。