《表2 SARS-CoV-2的实时荧光PT-PCR检测结果判读》

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《新型冠状病毒肺炎诊断的相关实验室检测技术应用》

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实时荧光RT-PCR检测核酸的方法具有灵敏度高、特异性强、相对基因测序速度快、可批量化和成本低的优点，但相对血清抗体检测，其对实验场所及人员要求高、操作繁琐、耗时长，检测人员感染风险高，结果受样本质量、实验条件及人员操作等因素影响较大[7]，特别是假阴性问题，使核酸检测的作用一度被质疑。假阴性结果主要由样本质量、样本采集时间与病毒含量、样本的保存、运输和处理及试剂盒本身的局限性、检验操作等因素导致，已有许多研究针对这些因素提出了对策：（1）样本质量。下呼吸道样本（深部痰、肺泡灌洗液或支气管灌洗液等）较上呼吸道样本（鼻咽拭子）更易检出病毒，但COVID-19患者一般为干咳无痰，灌洗液样本采集难度大、危险系数高；采集下呼吸道样本一般可在插管的患者中进行，上呼吸道样本建议采集鼻拭子，或同时采集鼻拭子和咽拭子，放入同一个采集管中，采集拭子宜采用植绒拭子[8-9]。（2）样本采集时间与病毒含量。随着病程的进展，不同部位的病毒含量是不同的，因此不同病程应采用不同方法采集不同部位的样本[10]。（3）样本的保存、运输和处理。RNA病毒核酸稳定性较差，样本采集后应该尽快进行检测，24 h内检测可置于4℃保存，无法24 h内检测，应-70℃或以下保存。样本的运输应在4℃进行，运输容器应有病毒保存液[11]。（4）试剂盒本身的局限性。应急研发生产的试剂盒缺少完整的临床应用和方法学验证，实验室在使用不同批号试剂前应做相应的性能验证[6]。选择至少包含最为保守及特异的ORF1ab区域以及N基因的试剂盒[12]。（5）检验操作。磁珠法是较为常用的核酸提取方法，具有简便、高效、提取浓度及纯度较高等优点[11]，实验室应参加室间质评并做好室内质控，指派专业人员进行检测。针对核酸检测的假阴性问题，大多学者建议以血清抗体检测作为SARS-Co V-2核酸检测阴性疑似病例的补充检测，或在疑似病例确诊时与核酸检测协同应用[13]。结果判读应结合各品牌试剂说明书（表2）。