《表2 ParaDNA检测仪各荧光通道检测基因阳性结果判读》

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《甲型流感病毒快速基因分型POCT方法的建立》

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将各种引物和探针混合于单管反应液中，经过不断优化后建立单管多重PCR反应体系，加入凝胶后形成半固体状态并制作成密封试剂盒，用于ParaDNA核酸POCT检测仪。单管试剂总反应体积为35.000μl。其主要成分如下：GoScript缓冲液7.000μl，MgCl2 1.750μl，LGC stock dNTP混合物1.120μl，DFP 2.800μl，Phire Hot Start II DNA聚合酶2.800μl，GoScript酶0.875μl，RNasin Plus 0.875μl，引物和探针混合物10.780μl，琼脂糖凝胶7.000μl。反应条件如下：50℃反转录5 min，95℃变性1 min，扩增阶段为94℃10 s，60℃15 s，72℃15 s，50个循环。然后进行熔解曲线分析，98℃1 min，20℃5 s，之后温度每升高0.5℃采集1次荧光信号，直至90℃。检测完毕后仪器自动报告结果，并降温。Para DNA核酸POCT检测仪各荧光通道检测基因及对应结果见表2。