《表2 反应体系的各成分：荧光PCR法检测结直肠癌组织及外周血KRAS基因突变率》

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《荧光PCR法检测结直肠癌组织及外周血KRAS基因突变率》

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按照人KRAS基因突变检测试剂盒所述方法，将2×Micro Diag Mutation Detection Mix、阳性质控品、纯化水以及稀释成同一浓度的待测组织样本基因组DNA或外周血游离DNA插入冰盒中，恢复至室温。将DNA聚合酶快速离心后置于冰上。其中Micro Diag Mutation Detection Mix(30人份）的组成为0.5～1μmol/L引物、0.2～0.5μmol/L阻滞剂、0.5～1 mmol/L d NTP、5 mmol/L Mg Cl2、36μl Eva Green、100 mmol/L KCl及纯化水。针对7个突变位点，使用Oligo软件设计的引物见表1，由Invitrogen公司合成。反应体系中各种成分见表2，每个总反应体积为20μl。PCR反应条件为：95℃预变性5 min，94℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸60 s，共35个循环，最后72℃延伸10 min，4℃结束反应。