《表2 本研究所用苜蓿品种》

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《紫花苜蓿Ⅲ型几丁质酶基因同源克隆与序列变异分析》

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注:*:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所种质编号

为保证试验材料具有广泛的地理起源，以16个苜蓿品种进行本次试验（表2）。16个苜蓿品种均随机选取20个生育期一致的单株，剪取等量的幼叶以提取基因组DNA。提取方法采用Dellaporta等（1983）的SDS法，并做修改：（1）将其中叶组织用量改为150 mg，所有药品试剂均按比例降低；（2）第一次DNA沉淀后用200μL的0.1×TE（pH=8.0，含RNase A 100 ng/μL）溶解DNA，65℃保温30 min，再加入300μL的TES（20 mmol/L Tris，2 mmol/L EDTA，2.5 mmol/L NaCl，pH=8.0）溶液，混匀，取上清，用标准乙醇沉淀法回收DNA并将其溶于30μL的0.1×TE（pH=8.0）。最后以λ-DNA为参照标准，用加有溴化乙锭（ethidium bromide，EB）的0.7%琼脂糖凝胶检测所提取DNA的质量和数量。各个单株均吸取等量的DNA，混合成DNA池，用于ChiⅢa基因的基因组序列的分离。