《表5 L9(34)正交试验设计》

《表5 L9(34)正交试验设计》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《基于Kingfisher Flex系统树木叶片RNA的提取方法比较及优化》


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注:S:慢;M:中等速度;F:快

对9个试验号提取的RNA的纯度和浓度的结果进行方差分析(表4),各处理间对提取的RNA浓度和纯度均有极显著影响(p<0.001)。因此需要对各试验处理间进行平均值的多重比较(数据未列示),寻求最优程序组合。其中,提取RNA浓度最高的最优水平组合为T3组合(RNA浓度为512.1 ng/μL,纯度OD260/OD280比值为1.66,OD260/OD230比值为1.11),提取RNA纯度最好的最优水平组合为T5组合(RNA浓度为88.97 ng/μL,纯度OD260/OD280比值为1.99OD260/OD230比值为2.02)。由于提取的RNA需要满足下游实验如Northern杂交、cDNA文库构建、实时定量PCR等分子生物学研究,对RNA的质量和纯度要求较高。因此,综合分析比较得到提取桉树叶片RNA的最优程序组合为T5(表5)(洗涤速度medium,洗脱速度medium,洗涤时间3 min,洗脱时间3 min)。T5程序(RNA浓度为88.97 ng/μL,纯度OD260/OD280比值为1.99、OD260/OD230比值为2.02)与试剂盒C默认程序(RNA浓度为296.97 ng/μL,纯度OD260/OD280比值为2.01,OD260/OD230比值为2.00)提取RNA的结果相比较,二者在提取RNA的纯度上较为一致,都能满足高纯度RNA的纯度要求,但T5程序下提取RNA的浓度较低,试剂C默认程序下提取RNA的浓度为T5程序下提取RNA的浓度的三倍左右。因此,综合分析后筛选出试剂盒C的默认程序为桉树叶片RNA提取的最优程序。