《表3 四引物ARMS-PCR标记T3-1-1的引物序列》

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《小麦抗麦红吸浆虫候选基因TraesCS4A01G437800的四引物ARMS-PCR标记开发》

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根据基因TraesCS4A01G437800上的特异性SNP位点设计了四引物ARMS-PCR标记T3-1-1（表3）。经检测，T3-1-1在两小麦亲本间均能检测出相应的分型，且具有多态性。该标记在两亲本中，均能扩增出170 bp的外引物扩增条带；在感虫亲本‘6218’中能扩增出111 bp的条带（B带型），在抗虫亲本‘冀麦24’中能扩增出96 bp和111 bp的杂合条带（H带型），所扩增出条带片段大小符合预期（图2）。根据该标记位点侧翼序列与小麦参考基因组序列（IWGSCv1.0）的比对结果得知，该序列在参考基因组中存在多个同源序列，且每个同源序列在标记位点上的碱基均为“G”，因此无论在抗、感虫小麦亲本中均能扩增出等位基因型“G”的条带（111 bp）；而在抗虫亲本中，标记位点的碱基为“T”，该突变在基因组中任何一个同源序列上均不存在，因此只能在抗虫亲本中扩增出等位基因型“T”的条带（96 bp）。根据这一扩增特性，可以在供试材料中检测出具有抗虫标记位点和不具有抗虫标记位点的小麦品种（株系）。