《表1 ACAA1基因引物信息》

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《鹅乙酰辅酶A酰基转移酶1基因的克隆、表达及生物信息分析》

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根据根据ACAA1-1、ACAA1-2和ACAA1-3引物PCR扩增获得的鹅ACAA1基因片段，分别设计5′和3′端巢式PCR引物（表1），巢式PCR扩增鹅ACAA1基因5′和3′端完整序列。RACE c DNA模板按照SMARTer TM RACE试剂盒说明制备获得，PCR反应总体系为50μL:10X Advantage2 PCR Buffer 5μL、d NTP Mix 1μL、50X Advantage2 Polymerase Mix 1μL、PCR-Grade Water 34.5μL、UPM 5μL、第1条引物1μL、c DNA模板2.5μL。反应条件：95℃30 s、72℃3 min，5个循环；95℃30 s、70℃30 s、72℃3 min，5个循环；94℃30 s、68℃30 s、72℃3 min，25个循环。然后以第1次PCR产物为模板，用第2条引物再重复1次PCR扩增，反应体系和条件与第一次PCR相同，然后PCR产物检测、纯化、克隆和测序。