《表1 相关基因引物序列信息》

《表1 相关基因引物序列信息》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《从江香猪OB基因序列及对皮下脂肪前体细胞的调控研究》


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注:表中下划线为限制性内切酶识别位点。

根据GenBank中公布的猪OB基因的序列(序列号为:U63540.1),运用Primer Premier5.0软件设计从江香猪OB基因的扩增引物,由重庆擎科兴业生物技术有限公司合成,引物序列信息见表1。Trizol法提取从江香猪不同组织器官的总RNA,RT-PCR进行cDNA第一条链的合成。逆转录步骤:向无核酸酶的PCR管中加入Oligo(dT)1μL、随机六聚体引物1μL、组织模板总RNA 1μL,用nuclease-free water补足12μL,然后65℃孵育5 min,再向以上得到的12μL混液中加入10×dNTP Mix 4μL、5×Reaction Buffer 2μL、RevertAid Reverse Transcriptase 1μL、RiboLock RNase Inhibitor 1μL,轻微震荡离心后放入PCR仪,反应程序为:42℃60 min,75℃5 min,4℃短暂保存,后将组织cDNA置于-20℃备用。