《表1 人MHC、NA、NB、NC及RPL19的引物序列》
SM:平滑肌;MLC:肌球蛋白轻链;MHC:肌球蛋白重链;NA:非肌肌球蛋白A;NB:非肌肌球蛋白B;NC:非肌肌球蛋白C;RPL19:核糖体蛋白L19;F:上游引物;R:下游引物
由于SMM同工异构体基因序列差异极小,特别是SM‐A仅在5'端比SM‐B少7个氨基酸,因此实时RT‐PCR或传统RT‐PCR很难将其区别开来,本研究采用竞争性RT‐PCR[8],引物如表1所示。参照TRIzol试剂说明书,提取总RNA,储存于-80℃备用;参照cDNA第一链合成试剂盒说明书,取1μg总RNA用于逆转录cDNA,得到产物用于下一步的竞争性RT‐PCR反应;参照Phusion Flash High‐Fidelity PCR Master Mix说明书,95℃预变性,5 min;95℃30 s;60℃30 s;72℃45 s;共30个循环;72℃延伸1 min,恢复至4℃,于4℃冰箱保存。最后使用2.5%的琼脂糖凝胶进行电泳。
图表编号 | XD00132706000 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.05.15 |
作者 | 江晔、刘道全、刘建民、陈平、张新华 |
绘制单位 | 蕲春县人民医院泌尿外科、武汉大学中南医院泌尿外科、武汉大学中南医院泌尿外科、武汉大学中南医院泌尿外科、武汉大学中南医院泌尿外科 |
更多格式 | 高清、无水印(增值服务) |