《表1 次级内共生菌PCR扩增引物及条件》

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《桑粉虱4种次级内共生菌的检测分析》


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以桑粉虱样本DNA为模版,使用烟粉虱种系分析通用的mtDNACOⅠ基因引物与反应条件(表1)进行PCR扩增,如扩增出约750 bp目的条带即表明样本基因组提取成功。将各样本DNA模板分别用各次级内共生菌特异性引物及反应条件进行目的基因PCR扩增(表1),25μL体系含:ddH2O 16.8μL,10×buffer 2.5μL,2.5 mmol/L dNTP 2μL,20μmol/L上、下游引物各0.5μL,DNA模板2.5μL,5 U/μLTaqDNA聚合酶0.25μL。选取各次级内共生菌目的基因PCR扩增代表性产物送样测序,测序结果于NCBI数据库进行BLAST比对分析,确定次级内共生菌种类。依据已明确次级内共生菌目的片段大小,判断各样本基因PCR扩增条带有无,统计桑粉虱样本各次级内共生菌感染率。