《表3.HBV体外复制细胞模型-传递载体系统》

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《乙型肝炎病毒体外感染和复制的细胞模型》

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由于HepG2和Huh7两种细胞的转染效率并非十分理想，研究者探索了基于病毒载体的高效递送系统以实现不同HBV毒株在肝细胞中的高效复制。1998年，Delaney等在昆虫细胞中构建制备了携带HBV复制子的重组杆状病毒，这种杆状病毒可以将具有功能性的HBV基因组导入肝癌细胞HepG2中，进而进行HBV的复制表达、感染性病毒颗粒的形成以及细胞内可检测到的cccDNA池的形成，且HBV病毒的表达水平与所感染的病毒量呈正相关[68–70]（表3）。该系统被广泛用于体外研究实验，如NA耐药突变型HBV的功能表型研究[71]以及新型抗HBV药物药效研究[72]。腺病毒载体也被应用到HBV复制子的递送中[73]，Sprinzl等以腺病毒为载体将HBV 1.3倍基因组导入293细胞中制备重组腺病毒以感染HepG2细胞，不仅检测到高效的HBV复制表达，还能通过腺病毒载体上的绿色荧光蛋白报告基因表达情况来判断基因转导效率。研究表明，使用携带HBV复制子的腺病毒载体感染不同种属的肝细胞，可实现HBV在不同种属肝细胞中的复制[74–75]（表3）。另外，以慢病毒作为载体的系统也被应用于体外研究[76]。有研究表明，使用含有HBV复制能力的重组杆状病毒和腺病毒衍生载体可促进体外更多的cccDNA量的形成[69，75]。尽管如此，基于病毒载体的HBV复制子传递系统也存在一些限制：第一，通过病毒载体的方式将HBV基因组转入细胞完全跳过了天然情况下HBV感染的入胞阶段，因此该系统不能用于HBV生活史中重要入胞阶段的研究；第二，部分对HBV感染的宿主胞内免疫应答可能会被对用于HBV传递的病毒载体的非特异性反应所掩盖[33]；第三，潜在的生物安全风险是限制该系统被广泛应用的主要因素。