《表2.HBV体外复制细胞模型》

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《乙型肝炎病毒体外感染和复制的细胞模型》

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1987年，Sells团队和Chang团队分别将二倍体的HBV基因组转入不同肝癌细胞实现了病毒的复制、病毒基因的表达以及感染性病毒颗粒的形成[57–58]，但病毒不能持续存在。HepG2.2.15细胞是在HepG2细胞中整合了双拷贝HBV基因组的稳定细胞株，能够稳定表达病毒基因相关产物并保证持续的HBV复制能力（表2），已被广泛用于HBV基础生物学问题的研究，同时为早期抗病毒药物的发展提供了工具[59–60]，Dandri等通过对HepG2.2.15细胞进行活性氧或DNA修复抑制剂处理，发现DNA损伤可以增加HBV整合的频率[61]。1997年，Lander等[62]利用四环素控制型CMV启动子构建了HBV 1.1倍基因组表达载体，转入HepG2细胞使其成为稳定整合HBV的HepAD38细胞株（表2）。在HepAD38细胞中，HBV pregenomic RNA的转录和病毒基因组复制可由四环素控制。与HepG2.2.15细胞系相比，HepAD38细胞系表达可调控，在Tet-off情况下HBV病毒的产量和胞内c c c D N A的积累显著高于HepG2.2.15[63]。利用该细胞系，Cui等发现TDP2（tyrosyl-DNA-phosphodiesterase 2）的缺失并不能阻断cccDNA的形成，该发现提示TDP2对于cccDNA的形成或许并不是必需的[64]。HepDE19细胞（表2）也是一种在Tet调控下表达HBV的稳转细胞系，该细胞系是将1.1倍体的HBV基因组转入细胞中，特殊的是整合的基因片段5′端pre-core的ATG突变成了GTG，而3′端pre-core的ATG保持完整，这种条件下HBV的E抗原（HBeAg）表达和分泌只能来源于共价闭合环状D N A（cccDNA），HBeAg的水平与胞内cccDNA水平是呈正相关的，从而为cccDNA靶向药物的高通量筛选提供了一个很好的模型[65–66]。在免疫检测中，由于HBeAg与HBcAg有154个氨基酸的同源性，多数用于HBeAg检测的抗体均与HBcAg存在一定程度的交叉反应，再加上naked HBV capsid的大量存在，使得在此种条件下采用商品化的HBeAg试剂检测到的可能不是真正意义上的HBeAg，可能无法准确反映胞内cccDNA的真实水平。为解决这一问题，Cai等[67]将HA标签（influenza hemagglutinin，HA）插入到HBeAg的precore区，在四环素调控下进行HBV的相关表达，以HA抗体为捕获抗体、HBeAb为检测抗体，获得了不影响HBV复制且无背景反应的cccDNA报告系统（HepBHAe82）（表2）。