《表1 PCR引物序列：视网膜中央静脉阻塞与凝血酶原基因G20210A及凝血因子Ⅴ基因Leiden突变的关系》

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《视网膜中央静脉阻塞与凝血酶原基因G20210A及凝血因子Ⅴ基因Leiden突变的关系》

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试剂盒提取总DNA，对目的基因进行PCR扩增，引物序列见表1。PCR反应总体积为50μl:TaKaRa Premix Taq 25μl，正向引物2μl，反向引物2μl，DNA模板4μl，纯化水17μl。反应条件:94℃预变性2 min；94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸30 s，35个循环；再72℃延伸5 min。产物经琼脂糖凝胶电泳后，溴化乙锭染色，由凝胶成像分析系统分析。取纯化后的PT基因和FⅤ基因PCR产物各10μl，纯化水7μl，酶切Buffer 2μl，分别加入限制性内切酶Mnl1和限制性内切酶HindⅢ1μl，37℃水浴16 h，酶切产物分别经电泳后，溴化乙锭染色，由凝胶成像分析系统分析。