《表1 PCR引物序列:TRPC3基因多态性与原发性高血压患者左心室肥厚的关系》

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《TRPC3基因多态性与原发性高血压患者左心室肥厚的关系》


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采用Sequenom MassAR‐RAY?SNP检测结合多重PCR技术、MassARRAYiPLEX单碱基延伸技术及基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术(博奥生物集团有限公司暨生物芯片北京国家工程研究中心)对TRPC3基因SNP位点Rs2292232、Rs4995894、Rs4292355进行基因分型检测。各位点引物序列见表1。根据Hapmap、NCBI-SNP数据库选择位点,按照最小等位基因频率(Miner Allele Frequency,MAF)>0.05且R2>0.8筛选出上述3个SNP位点。PCR反应体系:10×PCR反应缓冲液0.5μL、25 mmol/L MgCl20.4μL、25 mmol/L dNTP 0.1μL,二次蒸馏纯净水1.9μL,500 nmol/L引物混合物1.0μL,5 U/μL Hot‐StarTaq 0.1μL,DNA模板1μL。扩增条件:94℃4 min;94℃20 s,56℃30 s,72℃1 min,45个循环;72℃3 min,4℃保持。加入SAP Mix反应液2.0μL,SAP处理条件:37℃40 min,85℃5 min,4℃维持。加入单碱基延伸反应液2μL,单碱基延伸反应条件:94℃30 s;94℃5 s,(52℃5 s,80℃5 s)×5,40个循环;72℃3 min,4℃维持,运用MALDI-TOF质谱仪分析树脂纯化后的扩增产物,检测结果采用TYPER4.0软件(se‐quenom)分型。