《表2 扩增PCR反应液体系》

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《利用重组大肠杆菌发酵生产L-茶氨酸》


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在PCR仪上根据引物和片段长度分别设定退火温度(约低于理论退火温度5℃)和延伸时间。本实验使用Prime STAR酶作为DNA聚合酶,扩增速率约为1 kb/min。PCR反应条件:首先95℃预变性5min,之后进入如下循环:95℃变性30 s,55℃退火30 s,72℃延伸合适时间(根据片段长度),完成最后一个循环后,72℃继续延伸10 min。其中验证体系进行25个循环,回收体系进行30个循环。扩增PCR反应液体系如表2所示。