《表2 引物序列:不同行为表现的蜜蜂脑部多巴胺及其受体基因的检测分析》

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《不同行为表现的蜜蜂脑部多巴胺及其受体基因的检测分析》


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Gapdh为内参基因,其余为目的基因。

利用Primer Premier 5(Premier公司,加拿大)设计引物,根据试剂反应的最佳条件,引物设计的TM值控制在55-60℃之间,GC含量50%左右,发卡结构、自我配对、引物二聚体的|ΔG|均小于6,且上下游引物间相差不超过1℃,引物长度18-25 bp,产物大小在130-190 bp之间。设计好的引物用NCBI的blast功能检查引物的特异性,确保只有一个基因匹配。设计好后的序列由生工生物工程(上海)股仹有限公司代为合成,合成的引物用TE Buffer溶解为10 nmol/L的引物后保存在冰箱备用。经过普通PCR扩增后,迚行琼脂糖凝胶电泳,判断其产物是否单一,如果仅有一个产物条带则代表引物特异性好,则该引物符合后续实验的要求。内参基因选用Gapdh,目标基因为多巴胺受体基因Amdop1,Amdop2,Amdop3,转运体基因Amdat(表2)。