《表1 基因引物序列：BDNF及其受体Trk B在低氧预适应小鼠中的表达变化和作用》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《BDNF及其受体Trk B在低氧预适应小鼠中的表达变化和作用》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

使用Trizol法提取总RNA，在装有小鼠海马组织的EP管内加入300μL TRIzol液，用匀浆仪研磨20下，形成粉红色的匀浆。再加入200μL液并用注射器上下吸打10次，将匀浆样品放置在冰上5min，放入离心机离心（12000 r/min，4℃，5 min）。取上清加入100μL氯仿（氯仿:TRIzol=0.2∶1），温和上下混匀20次，室温放置15 min，再离心（13000r/min，4℃，5 min）。取上清于新EP管中并标记，加入250μL预冷异丙醇（异丙醇∶TRIzol=0.5∶1），上下混匀20次并离心（13000 r/min，4℃，10 min），离心后弃除上清即出现贴壁的RNA。加入1 m L75%预冷酒精洗涤RNA沉淀用手指弹EP管，使RNA漂起。1000 r/min，4℃，5 min离心，弃上清，室温干燥RNA沉淀。最后加入25μL无酶水回融，测OD值。使用First Strand Cdna Synthesis试剂盒（Thermo公司）将总RNA逆转录为cDNA，-20℃保存。引物由生物工程（上海）有限公司合成，BDNF基因、Trk B基因和β-Actin基因引物的设计见表1。在96孔板（ABI公司）加入3μLcDNA Template，1μL primer，10μL Mix以及高压水6μL共20μL，每个待测样品需重复3个空，3000 r/min，10 min离心。放入ABI7900HT Real-time PCR仪中，反应条件为50℃2min；95℃5 min；95℃30 s，59℃30 s，72℃30 s，共40个循环，72℃2 min延伸。