《表1 调控合成脂肽抗生素相关基因设计引物》

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《枯草芽胞杆菌M29产抑菌物质培养条件的优化及抑菌物质组成初探》

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枯草芽胞杆菌菌株间的抗生素合成基因序列相似度较高，本研究所用引物（表1）根据文献[15]报道获得。fen B、itu A基因引物在金斯瑞生物科技公司（南京）合成，目的片段大小分别为767和885 bp。PCR反应体系为：10×Taq buffer 2.5μL，Mg2+（25 mmol/L）2.5μL，d NTP（2.5 mmol/L）2μL，5′端引物（25 pmol/L)1μL，3′端引物（25 pmolμL/L)1μL，模板DNA 1μL，Taq聚合酶（5 U)0.3μL，H2O 14.7μL，总体积25μL。PCR反应条件：95℃预变性5 min；95℃变性1 min，52℃退火30 s，72℃延伸1 min 30 s，30个循环；72℃延伸10 min。PCR产物切胶回收后，连接到载体pMD18-T上，转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，挑取阳性克隆测序。测序由金斯瑞生物科技公司（南京）完成，DNA测序后的产物序列利用NCBI数据库的Blast程序进行同源检索，与GenBank数据进行比对分析。