《表3 芽孢杆菌脂肽类抗生素引物》

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《香蕉枯萎病拮抗芽孢杆菌脂肽类抗生素基因引物筛选》

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通过对各引物PCR程序优化（表3），得到最佳PCR反应程式为94℃预变性3 min，95℃变性45 s，60℃（ItuA为65℃）退火45 s，72℃延伸1min，30个循环，最后72℃再延伸5 min。采用该程序对CLPs相关合成基因序列进行扩增，发现所设计的引物中有12对可有效扩增芽孢杆菌CLPs基因（BamD-F/R，BamA-F/R，FenA-F/R，FenB-F/R，61FenA-F/R，61F-enB-F/R，ItuA-F/R，ItuB-F/R，ItuC-F/R，ItuD-F/R，Srf AA-F/R，SrfAB-F/R），供试芽孢杆菌中具有拮抗能力的芽孢杆菌均能扩增到ItuC基因。20株芽孢杆菌中，能扩增到BamD的达80%，能扩增到BamA的达90%，能扩增到FenA的达80%，能扩增到Fen B的达90%，能扩增到61FenA的达25%，能扩增到61FenB的达45%，能扩增到ItuA的达45%，能扩增到Itu B的达95%，能扩增到ItuC的达100%，能扩增到ItuD的达65%，能扩增到SrfAA的达65%，能扩增到Srf AB的达85%，MycF与Myc A均不能扩增到目的条带，其中ItuC的覆盖率最高，BamD、BamA、FenB、ItuA的特异性最高（图3）。