《表1 DNA Oligo片段及阴性对照》
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《大鼠shRNA-TRPC4重组腺病毒载体的构建及其在EPCs中转染效率的测定》
从GenBank中查询大鼠TRPC4基因(NM_001083115)上下游序列设计并合成4对siRNA前体寡核苷酸片段,siTR-PC4-1:GGT GGA ATC TAA TGG ACT TTG;siTRPC4-2:GCT TTG GAT GAG CTA CTT TGA;siTRPC4-3:GCA GCA TTC CTG GTC TCA ATG;siTRPC4-4:GGA GGA CTC AAG CAT AGA TTA。设阴性对照NC序列:TTC TCC GAA CGT GTC ACG T,合成DNA双链Oligo片段,见表1。将得到的DNA oligo片段加水溶解至40μmol/L。在退火体系中加入溶解好的正反义DNA oligo片段各18μL,10×Buffer 4μL,混匀后置于95℃水浴,10min后取出置于室温,使之自然冷却。取pDK-CMV-GFP-U6-shRNA载体经AgeⅠ和EcoRⅠ酶切使载体线性化。然后将双链DNA连接入酶切载体后转化入大肠杆菌DH5α感受态细胞,于恒温培养箱中培养16h。
图表编号 | XD0011971000 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2018.07.20 |
作者 | 林慕之、刘兴德、张璐、刘姿麟、刘志琴、况春燕 |
绘制单位 | 贵州医科大学附属人民医院、贵州省人民医院心内科、贵州医科大学附属医院心内科、贵州医科大学附属人民医院、贵州省人民医院心内科、贵州医科大学附属人民医院、贵州省人民医院心内科、贵州医科大学附属人民医院、贵州省人民医院心内科、贵州医科大学附属人民医院、贵州省人民医院心内科 |
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