《表1 引物序列：甘蔗鞭孢堆黑粉菌原生质体转化DNA双片段的基因敲除方法的建立》
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《甘蔗鞭孢堆黑粉菌原生质体转化DNA双片段的基因敲除方法的建立》
以敲除SsGPA3基因为例，以野生型基因组DNA为模板，使用SsGPA3-LB-F2/SsGPA3-LB-R2和SsGPA3-RB-F2/SsGPA3-RB-R2引物分别扩增SsGPA3基因的上、下游同源臂DNA片段LB、RB；将经过限制性内切酶XhoⅠ酶切线性化的pDNA-HPT载体与上游同源臂DNA片段LB混合，在重组酶ClonExpress II（诺唯赞，C112-01）作用下重组成环状质粒pDNA-LB-HPT，然后转化于大肠杆菌Escherichia coli感受态细胞中，在含有氨苄青霉素（ampicillin）的培养基中进行筛选并测序鉴定；同理，含有上游同源臂的pDNA载体经过限制性内切酶SpeⅠ酶切线性化，然后将下游同源臂DNA片段RB连接到含有上游同源臂的pDNA-LB-HPT载体中，进而构建上游同源臂-HPT-下游同源臂的载体质粒pDNA-LB-HPT-RB。PCR扩增的DNA聚合酶同上；引物序列见表1。
| 图表编号 | XD00198483700 严禁用于非法目的 |
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| 绘制时间 | 2020.12.22 |
| 作者 | 蔡恩平、梅丹、张小萌、孙贤、李玲玉、吴熔熔、邓懿祯、姜子德、常长青 |
| 绘制单位 | 华南农业大学植物保护学院、华南农业大学植物保护学院、华南农业大学植物保护学院、华南农业大学植物保护学院、华南农业大学群体微生物研究中心广东省微生物信号与病害防控重点实验室、华南农业大学植物保护学院、华南农业大学群体微生物研究中心广东省微生物信号与病害防控重点实验室、华南农业大学植物保护学院、华南农业大学植物保护学院、华南农业大学群体微生物研究中心广东省微生物信号与病害防控重点实验室、华南农业大学植物保护学院、华南农业大学植物保护学院、华南农业大学群体微生物研究中心广东省微生物信号与病害防控重点实验室 |
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