《表4 p RS42H-gHIS1和donor DNA片段共转化》

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《CRISPR-Cas9系统介导的工业酵母营养缺陷型菌株构建》

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按表4将上述质粒pRS42H-gHIS1和donor DNA片段共转化2.1中构建的菌株K-a（YCplac33-Cas9）感受态细胞，涂布（CMG-URA+潮霉素）筛选平板，按“1.4酿酒酵母感受态细胞的制备及转化”所述进行筛选。PCR鉴定产物预期大小为1 132bp，电泳结果见图5；进一步的测序结果证明按预期敲除了HIS1基因ORF的第411～418位共8bp碱基序列，造成了移码突变。表4的统计结果显示:涂布平板生长菌落为目的菌株的比例为74.4%。