《表2 Illumina测序小麦原生质体基因编辑结果》

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《小麦Pinb基因启动子区CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建》

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采用PEG法转化小麦原生质体，将转化后孵育2～3 d的小麦原生质体用植物基因组DNA提取试剂盒提取小麦基因组DNA，对靶位点进行扩增后建库测序。测序结果表明目标的编辑类型主要是SNP和InDel。其中，Pinb-gR1位点具有4.57%的突变效率，包括4.49%的SNP和0.08%的InDel。Pinb-gR2位点的突变效率4.37%，包括4.05%的SNP和0.33%的In Del（表2）。Pinb-gR1突变位点检测（图7a）发现编辑位点（PAM序列前第4位）处有碱基的替换和缺失，包括单碱基的替换、单碱基的缺失以及4个碱基的缺失。Pinb-gR2突变位点检测结果见图7b，突变类型主要是单碱基替换和缺失，另外，在PAM前的其它位点也检测到了突变。