《表2 P.pastoris KM71/p PIC9K-Agd B/p PICZ-Mpr1在不同甲醇诱导浓度下的发酵情况》

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《共表达N-乙酰转移酶提高Aspergillus nidulans α-葡糖苷酶在毕氏酵母中的表达研究》

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在P.pastoris发酵过程中，甲醇既是诱导发酵阶段的唯一碳源也是促进目的蛋白质表达的诱导剂。P.pastoris KM71/pPIC9K-AgdB/pPICZA-Mpr1重组菌株通过共表达N-乙酰转移酶，可以提高抗氧胁迫能力从而维持细胞正常生长，但以甲醇为碳源的酵母细胞在发酵过程中仍会产生大量的小分子过氧化物如甲醛和H2O2等，使细胞内的ROS含量维持在较高水平从而对细胞造成毒害作用，破坏细胞正常生理状态[18]，使菌体数量下降，不利于外源蛋白质的表达和积累。因此，发酵过程将甲醇浓度调节至适合菌体生长的浓度非常关键[19]。在诱导培养P.pastoris KM71的过程中，甲醇的浓度可直接影响细胞生长状态和表达水平。在进行发酵优化过程中，将初始诱导OD600控制在100、pH为5.0、溶解氧30%、28℃条件下，将甲醇浓度分别设置在0.5%、1%、1.5%观察重组菌株生理生长和α-葡糖苷酶的产酶情况，结果如表2、图5所示。由实验结果可知，当发酵过程中甲醇浓度控制在1%时，P.pastoris KM71/pPIC9K-AgdB/pPICZA-Mpr1菌体生长产酶情况最好，酶活和蛋白质含量最高可达100.8U/ml和1.62mg/ml，是出发菌株上罐产酶的1.54倍和1.33倍。P.pastoris KM71属于甲醇利用迟缓型[20]，优化后的1%甲醇浓度已经能够满足菌体正常生长所需，且能够激活AOX1酶[21]从而表达外源蛋白质。