《表1 P.pastoris KM71/p PIC9K-Agd B/p PICZ-Mpr1在不同诱导温度下的发酵情况》

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《共表达N-乙酰转移酶提高Aspergillus nidulans α-葡糖苷酶在毕氏酵母中的表达研究》

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在毕氏酵母发酵过程中，温度对细胞生长速率和外源蛋白质表达效率有关键影响。在一定程度上降低诱导温度能促进P.pastoris细胞内物质及能量代谢，减少细胞自身蛋白酶的分泌而降解外源蛋白质，从而提高细胞对外源蛋白质的表达效率[16]，并且有利于蛋白质的正确折叠，减少因错误折叠发生的细胞自溶和蛋白质降解来提高蛋白比酶活[17]。因此，研究调控不同诱导温度对重组菌株生长和产α-葡糖苷酶的影响，将初始诱导OD600控制在100、pH5.0、维持溶解氧浓度在30%、诱导甲醇浓度为1%的条件下，分别研究25℃、28℃、30℃诱导温度对发酵的影响。菌体生长和产酶情况如图4、表1所示。由实验结果可知，在25℃下，P.pastoris KM71/pPIC9K-AgdB/pPICZA-Mpr1菌体生长情况最好，最高酶活和蛋白质含量可达128.12U/ml和1.81mg/ml，分别是出发菌株上罐酶活和蛋白质含量的1.96倍和1.50倍。说明较低的发酵温度有利于细胞的增殖，利于目的蛋白质的正确折叠和积累。但考虑到低温造成的工业成本，对后续发酵过程优化时仍然选用发酵状态较好的28℃优化其他条件。