《表1 巴德-毕特尔综合征4(bbs4）基因PCR扩增引物》

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《莱茵衣藻BBSome组分蛋白BBS4的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备》

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以实验室保存的莱茵衣藻cDNA为模板，通过设计的引物做PCR扩增（表1），得到大小为1224 bp的bbs4基因的目的片段；将PCR扩增得到的bbs4片段、p ET-28a（+）和pMAL-c2X载体同时用BamHⅠ和HindⅢ做双酶切，将目的基因与载体片段回收，以摩尔质量比为1∶3室温连接1 h；转化至E.coli XL1-blue，在含有相应抗性的平板上37℃培养14～16 h；挑取转化子至LB液体培养基中过夜培养，提质粒后进行BamHⅠ和HindⅢ的双酶切，条带大小与预期一致则进行测序验证[8]。