《表1 PLA2G7基因扩增引物序列》

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《重组人脂蛋白相关磷脂酶A2的原核表达及单克隆抗体制备》

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在美国国立生物技术信息中心（NCBI）上检索得到人Lp-PLA2基因序列，并设计特异性引物在上、下游两端分别添加NotⅠ、SalⅠ酶切位点，引物序列见表1。以人类cDNA文库为模板，对PLA2G7基因进行扩增。反应程序如下：95℃5min；95℃60s，55℃40s，72℃80s，35个循环；72℃5min。通过电泳，回收1 275bp的目的片段，与pEASY-T1中间载体进行连接，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，将菌液涂布于含有卡那霉素的LB固体培养基上，37℃培养过夜。挑取单克隆，扩大培养后提取质粒，进行PCR和酶切鉴定，将筛选得到的阳性克隆送济南博尚生物有限公司进行测序。