《表1 各基因扩增引物序列》

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《缺氧对耳蜗听神经元电压门控性钠通道及凋亡因子表达的影响》

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参照美国赛默飞公司Trizol试剂盒说明书实验步骤，分别提取对照组和实验组细胞总RNA；参照瑞士罗氏公司试剂盒说明书实验步骤，对提取的总RNA进行逆转录，以β-肌动蛋白（ACTB）为内参，采用美国API公司7500型PCR分析仪进行扩增。Nav1.1、Nav1.6、Nav1.7α亚单位，Caspase-3及ACTB扩增引物有华大基因公司合成，引物序列见表1。按照qPCR法对扩增获得的cDNA进行定量分析，各定量分析均重复3次。qPRC反应程序:预变性95℃10min，PCR反应95℃15s、60℃30s循环40次，65～95℃进行熔解曲线检测。所有标本检测均设阴性对照以排除污染所致假阳性结果，均制备标准曲线以确保扩增效率一致。采用扩增循环数（Ct值）计算各基因mRNA相对表达量。Ct值指扩增产物荧光信号达到设定阈值所需要的扩增循环次数。对照组基因mRNA表达量设为1，采用2-ΔΔCt法计算实验组Nav1.1、Nav1.6、Nav1.7α亚单位及Caspase-3mRNA相对表达量，并进行比较。ΔCt=Ct目的基因-Ct内参基因；ΔΔCt=ΔCt实验组-ΔCt对照组；相对表达量=2-ΔΔCt。