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上篇生物化学研究技术原理1

第一章 生物化学制备技术概论1

第一节 生化分离制备方法的特点1

第二节 溶剂提取法2

第三节 沉淀法3

第四节 膜分离技术6

第五节 浓缩与干燥8

第二章 离心9

第一节 离心技术基本原理与设备9

第二节 制备超离心方法15

第三节 超速离心技术在生化研究中的应用16

第三章 层析20

第一节 层析概述20

第二节 凝胶层析21

第三节 离子交换层析24

第四节 纸层析28

第五节 薄层层析30

第六节 聚酰胺薄膜层析32

第七节 亲和层析33

第八节 气相色谱原理及其在生化研究中的应用39

第九节 高压液相色谱原理及其在生化研究中的应用41

第四章 电泳43

第一节 电泳的基本原理43

第二节 影响电泳的主要因素44

第三节 聚丙烯酰胺凝胶电泳45

第四节 琼脂糖凝胶电泳51

第五节 电泳及配套技术的新进展53

第五章 酶的分离、纯化及活力测定56

第一节 材料的选择和处理57

第二节 酶的提取、分离与纯化58

第三节 酶活力的测定61

第六章 同工酶分析63

第一节 同工酶概述63

第二节 同工酶的分析与鉴定64

第三节 同工酶分析技术的应用66

第七章 植物主要成分分析68

第一节 试样的采集和处理68

第二节 水分分析69

第三节 碳水化合物的分析72

第四节 蛋白质的分析79

第五节 核酸的分析87

第六节 脂质分析91

第八章 蛋白质序列分析92

第一节 蛋白质序列分析的基本战略93

第二节 蛋白质序列分析的一般方法和步骤95

第三节 氨基酸组成分析97

第四节 蛋白质的裂解101

第五节 末端氨基酸残基的测定105

第六节 手工微量序列测定技术107

第七节 蛋白质自动序列分析仪110

第八节 二硫键及其位置的确定111

第九章 核酸的制备与分析111

第一节 DNA的制备及分析111

第二节 RNA的制备与分析121

第三节 DNA的顺序分析124

第四节 DNA的体外扩增——PCR技术132

第一节 克隆载体136

第十章 DNA重组技术136

第二节 DNA和RNA的酶学操作144

第三节 cDNA文库的构建与筛选159

第四节 重组DNA导入寄主细胞165

第十一章 免疫化学技术170

第一节 概述170

第二节 抗原与抗体171

第三节 免疫途径171

第四节 免疫反应测定方法173

第五节 免疫化学技术的应用176

第十二章 放射性同位素示踪技术178

第一节 基本知识178

第二节 放射性的测量180

第三节 射线的剂量与卫生防护183

第四节 放射性同位素示踪技术在生化领域中的应用184

下篇生物化学实验187

第一单元 成分分析187

实验一 谷物及植物材料中还原糖、可溶性糖及淀粉含量分析187

实验二 谷物脂肪含量及脂肪酸组分分析189

实验三 谷物蛋白氮和非蛋白氮的测定191

实验四 植物组织中金属元素的测定193

第二单元蛋白质196

实验五 谷物种子蛋白质的分级分离196

实验六 蛋白质分子量的测定(SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法)198

实验七 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦法测定蛋白质等电点200

实验八 蛋白质的双向电泳202

实验九 蛋白质N-末端的测定(DNS法)204

实验十 蛋白质C-末端的测定(肼解法)207

实验十一 种子蛋白氨基酸组分分析208

实验十二 亲和层析法提纯麦胚凝集素209

第三单元214

实验十三 苹果酸脱氢酶的纯化与活力测定214

实验十四 硝酸还原酶的离体测定216

实验十五 脲酶Km值的测定218

实验十六 酸性磷酸酯酶的动力学测定221

实验十七 植物过氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳223

第四单元核酸225

实验十八 植物组织中DNA的分离225

实验十九 叶绿体DNA的分离及纯化229

实验二十 线粒体DNA的分离及纯化232

实验二十一 碱性SDS法提取大肠杆菌质粒DNA235

实验二十二 ECoRI酶切质粒DNA及Southern转移238

实验二十三 DNA的分子杂交240

实验二十四 植物mRNA的分离与纯化246

实验二十五 RNA的碱基组成分析248

第五单元代谢251

实验二十六 光合磷酸化反应活力的测定251

第六单元 免疫化学技术253

实验二十七 单向免疫扩散253

实验二十八 双向免疫扩散试验255

实验二十九 对流免疫电泳256

实验三十 单向火箭免疫电泳257

实验三十一 酶联免疫间接法测定抗体258

实验三十二 酶联免疫双抗体夹心试验261

附录:262

参考文献276

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