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第一章 绪论1

第二章 糖的分离和分析8

一、糖的定量测定8

（一）中性糖的测定12

1．还原糖的次亚碘酸盐定量法12

2．3，5-二硝基水杨酸（DNS）比色法13

3．Somogyi-Nelson法14

4．苯酚-硫酸法16

5．蒽酮-硫酸法17

6．地衣酚-硫酸法18

7．戊糖的测定（地衣酚法）19

8．己糖和6-脱氧己糖的比色测定20

9．葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖21

（二）氨基己糖的测定23

1．氨基己糖的比色测定23

2．N-乙酰氨基己糖的比色测定25

3．用Ehrlich试剂测定氨基糖26

（三）己糖醛酸的测定30

1．己糖醛酸的比色测定30

二．糖的色谱法31

（一）糖的纸色谱31

1．单糖和双糖的纸色谱31

2．寡糖和多糖的纸色谱39

3．多羟基醇的纸色谱40

4．糖酸的纸色谱41

5．氨基糖的纸色谱42

6．糖内酯的纸色谱42

7．糖磷酸酯的纸色谱43

（二）糖的柱色谱46

1．糖的活性炭柱分离46

2．蜂蜜中寡糖的炭柱分级法48

3．糖的离子色谱法分析49

（三）糖的气相色谱57

1．糖的三甲基硅醚衍生物58

2．糖腈乙酸酯衍生物60

3．糖醇乙酸酯衍生物63

4．糖的三氟乙酸酯衍生物65

5．果糖和葡萄糖或甘露糖共存时的气相色谱定量法67

6．气相色谱同时测定醛糖与糖醛酸69

7．气相色谱用于微量多糖与寡糖成分分析71

（四）糖的高效液相色谱74

1．单糖和双糖的分析76

2．寡糖的分离和测定83

3．糖肟全苯甲酸酯紫外标记法分离和测定微量单糖和双糖89

4．脉冲安培检测法（HPAEC-PAD）用于单糖和寡糖的分析90

5．神经节苷脂的高效液相色谱分析（HPLC）100

（五）糖的薄层色谱102

三、糖的电泳法105

1．红细胞膜上唾液酸的等速电泳106

2．多糖的滤纸电泳108

3．多糖的玻璃纤维纸电泳110

4．多糖的醋酸纤维薄膜电泳111

5．多糖的凝胶电脉112

6．单糖的高效毛细管电泳113

7．糖蛋白的高效毛细管电泳116

8．酸性多糖与寡糖的等电聚焦和聚丙烯酰胺凝胶电泳120

四、糖复合物中其它成分的测定122

1．糖复合物中乙酰基的测定122

2．糖复合物中硫酸基的测定124

第三章 复合糖化物的物化性质126

一、多糖的纯度鉴定128

1．比旋度法128

2．超离心法129

3．高压电泳法129

4．凝胶过滤法131

二、复合糖化物分子量的测定133

1．测定多糖分子量的方法原则133

2．渗透压法测定多糖分子量138

3．蒸气压法测定多糖分子量141

4．端基法测定多糖分子量143

5．光散射法测定多糖分子量148

6．粘度法测定多糖分子量155

7．高效液相色谱法测定多糖分子量（1）158

8．高效液相色谱法测定多糖分子量（2）166

9．超过滤法及其在多糖化学研究中的应用170

10．凝胶过滤法测定糖蛋白与糖肽的分子量180

第四章 糖链结构分析方法183

一、从糖蛋白分离糖链或糖肽184

1．O-糖苷键的稀碱水解（β-消除反应）184

2．N-糖苷键的肼解法186

3．N-糖苷键的三氟乙酸水解法189

4．多糖的部分酸水解191

5．糖蛋白与糖肽的部分酸水解194

6．从卵清蛋白制备糖肽196

7．酶解法从糖蛋白释放糖链199

二、用于结构研究的化学方法202

1．高碘酸氧化202

2．Smith降解204

3．甲基化反应（改良Hakomori法）206

4．甲基化反应（硫酸二甲酯法）209

5．多糖中乙酰基的定位211

三、糖苷酶在结构分析中的应用和其它213

1．肼解法释放牛凝血酶原寡糖的顺序测定224

2．β-N-乙酰氨基葡萄糖苷内切酶-H（Endo-H）的分离纯化225

3．β-甘露糖苷酶的分离纯化229

4．一种能分解琥珀酸型聚糖的内切酶的分离纯化231

5．从土壤细菌中初步分离α-甘露糖苷酶和α（1→6）甘露聚糖内切酶233

6．枯草杆菌α-淀粉酶的分离纯化237

7．红色红曲霉α-葡萄糖苷酶的分离纯化240

8．茁霉多糖酶的分离纯化244

9．多聚半乳糖醛酸内切酶的分离纯化247

10．几丁质酶的分离纯化249

11．菊糖酶的分离纯化252

12．真菌纤维素酶系的分离纯化255

13．木聚糖酶系的分离纯化259

14．糖苷酶的固定化261

15．硝基苯酚糖苷化合物的有机合成262

四、用于糖链结构分析的仪器分析方法271

1．糖的红外光谱法271

2．糖的拉曼光谱法279

3．糖的质谱法284

4．全乙酰化低聚木糖的质谱研究287

5．全苄基化缩水内醚糖的质谱研究292

6．色质联用进行低聚糖的结构序列分析303

7．质谱法测定痕量的完整寡糖307

8．神经节苷脂的快原子质谱结构分析318

9．1H和13C核磁共振光谱在多糖上的应用324

五、糖链结构研究中的免疫学方法340

1．抗原的制备340

2．抗血清的制备346

3．抗血清的处理和纯化347

4．效价的测定和糖结构分析348

第五章 糖复合物的其它研究方法355

一、同位素标记在糖复合物微量分析中的应用355

二、拟糖蛋白（Neoglycoproteins）的合成和应用358

（一）糖与蛋白质形成共价联接的方法361

1．重氮盐偶合法361

2．重氮偶联法363

3．异硫腈酸酯法364

4．异硫氰酸苯基-α-L-岩藻糖苷和BSA的偶联366

5．还原胺化法合成拟糖蛋白368

6．寡糖天冬酰胺经茚三酮激活后用还原胺化法和蛋白质偶联370

7．还原胺化法偶联糖蛋白和蛋白质372

8．还原氨基化方法374

9．活化酰基化方法375

10．糖肽与蛋白质的偶联376

11．双功能试剂交联法合成拟糖蛋白（1）379

12．双功能试剂交联法合成拟糖蛋白（2）380

13．脒化法合成拟糖蛋白380

（二）水不溶性糖类载体和蛋白质的偶联——以糖类成分为基质的蛋白质和酶的固定化386

1．溴化氰活化法387

2．重氮法388

3．用双环氧试剂的交联法390

（三）拟糖蛋白的应用391

1．用于糖结合蛋白的分离和鉴定391

2．作为组织化学的标记物393

三、多糖的化学修饰394

（一）非选择性化学修饰395

1．酯化395

2．甲基化400

3．O-羧甲基化，O-羧甲基纤维素钠的制备402

（二）选择性化学修饰403

1．伯羟基的酯化403

2．伯羟基的醚化405

3．伯羟基的氧化407

4．仲羟基的氧化409

5．羧基的还原410

6．羧基的酰化411

7．N-酰化412

（三）末端基团的修饰413

第六章 多糖416

一、植物多糖416

（一）细胞内贮存多糖的提取和分离418

1．当归水溶性多糖的提取和分离418

2．亲和层析法分离直链淀粉和支链淀粉420

（二）果胶类物质的提取和分离422

1．单子叶植物细胞壁中鼠李-半乳糖醛酸聚糖的分离422

2．双子叶植物细胞壁中鼠李-半乳糖醛酸聚糖的分离423

（三）半纤维素的提取和分离425

1．悬浮培养细胞半纤维素的分离425

2．新鲜植物组织半纤维素的分离430

（四）树胶和粘胶多糖436

1．根部多糖的分离436

2．茎部多糖的分离437

3．叶中多糖的分离438

4．皮部多糖的分离439

5．花中多糖的分离441

6．种荚多糖的分离442

7．培养组织材料中多糖的分离442

8．大蒜球根部多糖的提取443

（五）寡糖素446

1．寡糖素（寡聚半乳糖醛酸）的酶法制备、纯化和活性测定446

二、微生物多糖447

1．粪产碱杆菌产粘变株胞外酸性多糖的纯化448

2．斜顶菌（Clicoplus caespitosus PK）水溶性多糖的分离提纯449

3．香茹（Lentinus edodes）碱溶性多糖的分离提纯451

4．酵母甘露聚糖的分离提取452

5．酵母甘露聚糖的选择性乙酰解反应455

6．免疫学方法在酵母甘露聚糖结构研究中的应用457

7．树舌（Ganoderma applanatum）中色素多糖的分离制备460

三、海藻多糖461

（一）褐藻多糖462

1．褐藻多糖的分析法463

2．褐藻多糖物理性质的测定474

3．褐藻胶的分离与提纯475

4．褐藻糖胶的分离与提纯476

5．褐藻淀粉（海带淀粉）的分离与提纯477

（二）红藻多糖478

1．红藻多糖的分析方法480

2．红藻多糖物理性质的测定488

3．琼胶的分离与提纯493

4．琼脂糖的分离与制备495

5．珠状琼脂糖的制备和提纯497

6．卡拉胶的分离与提纯498

第七章 糖蛋白500

一、动物来源糖蛋白500

1．粘液糖蛋白的分离500

2．膜糖蛋白的分离503

3．纤维粘连蛋白的测定方法507

二、植物来源糖蛋白510

1．中药知母（Anemarrhena asphodeloides）糖蛋白的提取与分离511

2．胡萝卜（Daucus carota L．）根细胞壁伸展蛋白的提取与分离513

3．萝卜（Raphanus sativus L．Var．hortensis backer）叶糖蛋白的提取与分离514

4．葡萄（Carignan noir CV）渣中糖蛋白的提取与分离514

第八章 蛋白聚糖516

一、糖胺聚糖（GAG）的分离提取526

1．糖胺聚糖的一般提取方法526

2．组织中糖胺聚糖的提取528

3．透明质酸的分离提取529

4．4-硫酸软骨素的分离提取531

5．6-硫酸软骨素的分离提取533

6．软骨素的制备534

7．硫酸皮肤素的分离提取536

8．肝素的分离提取538

9．低分子肝素的制备540

10．硫酸乙酰肝素（硫酸类肝类）的分离提纯542

11．硫酸角质素的分离提取545

12．海参糖胺聚糖的分离提取547

二、糖胺聚糖（GAG）的分析和测定549

（一）糖胺聚糖的电泳法鉴定551

1．糖胺聚糖乙酸纤维素膜双向电泳552

2．糖胺聚糖乙酸纤维素膜单向电泳553

3．糖胺聚糖的琼脂糖凝胶电泳554

4．糖胺聚糖不连续琼脂糖凝胶电泳556

5．糖胺聚糖聚丙烯酰胺凝胶电泳558

（二）糖胺聚糖的酶学与化学法组成鉴定560

1．糖胺聚糖的酶降解560

2．糖胺聚糖中氨基己糖的鉴别测定564

3．糖胺聚糖中己糖醛酸的鉴别测定565

4．糖胺聚糖中硫酸基／羧酸基比值测定567

5．糖胺聚糖中N-乙酰氨基己糖／己糖醛酸的比值测定570

6．糖胺聚糖中N-硫酸基／总硫酸基的比值测定571

（三）糖胺聚糖的定量分析573

1．凝胶过滤法测定糖胺聚糖的分子量573

2．总糖胺聚糖的含量测定574

3．混合糖胺聚糖中各聚糖相对含量测定575

4．糖胺聚糖的比色定量法576

（四）尿中糖胺多糖的测定方法577

1．原子吸收法578

2．单向电泳法579

（五）糖胺聚糖的酶解582

三、人主动脉蛋白聚糖（PG）的研究方法584

（一）蛋白聚糖的提取、分离与鉴定584

1．蛋白聚糖的解聚提取584

2．蛋白聚糖的分离585

3．蛋白聚糖（或糖胺聚糖）的鉴定589

4．蛋白聚糖中硫酸根位置的分析592

（二）蛋白聚糖的生物学性质的研究594

1．蛋白聚糖与外源性透明质酸（HA）的再聚集作用594

2．蛋白聚糖与脂蛋白（LP）的相互作用595

四、培养的动物细胞中蛋白聚糖（PG）的研究方法598

1．细胞培养与标记蛋白聚糖的提取599

2．离子交换柱层析分离蛋白聚糖603

3．凝胶过滤柱层析分离蛋白聚糖604

4．氯化铯等密度超速离心法分离蛋白聚糖605

5．糖胺聚糖和寡糖的分离鉴定及蛋白聚糖的结构分析606

五、各种来源蛋白聚糖的提取和分离612

1．软骨蛋白聚糖的提取和分离612

2．脑组织硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的提取与分离614

3．角膜硫酸角质素蛋白聚糖的提取和分离618

4．蛋白聚糖的部分酸水解621

5．蛋白聚糖的非特异性蛋白酶消化622

6．蛋白聚糖的特异性蛋白酶消化622

第九章 神经鞘糖脂624

一、神经节苷脂的的分离和纯化631

（一）分配分离法631

1．Suzuki改良Folch分配法631

2．Ladisch分配法633

（二）离子交换法636

二、神经节苷脂的鉴定639

（一）神经节苷脂的定量——唾液酸含量的测定639

1．间苯二酚-盐酸法639

2．过碘酸-间苯二酚法640

3．硫代巴比妥酸法641

（二）薄板层析（TLC）法642

（三）高效薄板层析（HPTLC）板放射免疫分析法643

三、中性糖脂的分离和纯化645

四、鞘糖脂抗体的制备和鉴定647

第十章 凝集素651

一．凝集素的分离、纯化和鉴定659

（一）天然的或修饰的聚糖作亲和吸附剂659

1．伴刀豆凝集素（ConA）的纯化662

2．蓖麻凝集（RCA1）的纯化663

3．麦胚凝集素（WGA）的纯化665

4．花生凝集素（PNA）的纯化666

（二）结合载体的糖蛋白或糖肽作亲和吸附剂668

1．植物血凝素（PHA）的纯化675

2．麦胚凝集素（WGA）的纯化672

（三）结合载体的单糖或双糖作亲和吸附剂673

1．大豆凝集素（SBA）的纯化677

2．蓖麻蚕血淋巴凝集素（PLL1）的纯化679

3．花生凝集素（PNA）的纯化680

（四）细胞膜凝集素的纯化681

（五）凝集素的疏水层析683

（六）鉴定凝集素的一般方法685

1．血凝活力的鉴定685

2．凝集素糖结合活性的定量测定方法686

3．纯度鉴定688

4．糖蛋白鉴定689

（七）附注692

1．Sepharose的酸处理692

2．甲状腺球蛋白-Sepharose的制备692

3．卵粘蛋白-Sephsrose的制备693

4．半乳糖胺-CH-Sepharose的制备694

5．GalNAc-Epoxy-Sepharose的制备694

6．Rha-Sepharose4B的制备695

7．乳糖-淀粉凝胶亲和吸附剂的制备695

8．固定化红血球696

9．麦芽糖-淀粉凝胶的制备697

二、凝集素衍生物的制备697

（一）标记凝集素的制备697

1．放射性标记凝集素697

2．酶标记凝集素702

3．荧光标记凝集素707

4．生物素（biotin）标记凝集素709

5．铁蛋白标记凝集素710

6．胶体金-凝集素复合物的制备712

（二）固定化凝集素的制备713

1．ConA-Sepharose4B的制备713

2．RCA-Sepharose4B的制备（带己二胺“臂”）714

3．ConA-Sepharose6B的制备（氰基硼氢化钠法）714

4．溴化氰活化法制备固相化凝集素716

三、凝集素在生物科学与医学研究中的应用717

（一）用固定化凝集素分离纯化糖蛋白718

1．白扁豆β-N-乙酰氨基己糖苷酶的分离纯化719

2．猪大网膜脂肪细胞膜糖蛋白的分离纯化720

3．血型物质MN抗原的纯化723

4．用ConA-Sepharose4B分离ConA亲和蛋白724

5．固相化凝集素的强化725

（二）用凝集素检测糖复合物并推测其寡糖结构727

1．测定溶液中的糖复合物727

2．测定细胞膜和亚细胞结构上的糖复合物737

后记745