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第一章生物大分子的基本制备技术1

一、材料选择及预处理1

二、细胞的破碎及细胞器的分离2

三、提取5

（一）蛋白质和酶的提取5

（二）核酸的提取7

四、分离纯化8

（一）蛋白质和酶的分离纯化9

（二）核酸的分离纯化12

五、浓缩、干燥、保存13

六、实验实例13

（一）人胎盘丙种球蛋白的制备13

（二）胰岛素的制备15

（三）碱性磷酸酶的提取分离及比活性的测定17

（四）具有生物活性DNA的制备22

（五）酵母RNA的提取和定性24

第二章分光光度法27

一、基本原理27

二、分光光度计的结构原理31

（一）光源31

（二）单色器33

（三）狭缝34

（四）比色杯34

（五）检测系统35

三、实验实例36

（一）考马斯亮兰法测定蛋白质含量36

（二）紫外吸收法测定核酸的含量38

（三）血糖定量（邻甲苯胺比色法）41

（四）谷丙转氨酶活性的测定（赖氏法）43

第三章纸上分配层析技术48

一、基本原理49

二、影响Rf值的主要因素50

（一）物质结构与极性的影响51

（二）层析溶剂的影响52

（三）pH的影响53

（四）展开方式与Rf值的关系54

（五）温度的影响54

（六）滤纸的影响54

三、具体操作56

（一）样品的处理56

（二）点样56

（三）展开57

（四）显色62

（五）Rf值测量64

（六）定量分析64

四、实验实例：圆形滤纸层析法分离氨基酸65

第四章离子交换层析技术68

一、基本原理68

二、交换剂71

（一）交换剂的基本类型71

（二）交换剂的选择74

（三）交换剂的处理、再生与转型78

三、离子交换层析的方法81

（一）层析柱81

（二）装柱与加样82

（三）洗脱与收集83

四、实验实例89

（一）离子交换树脂法分离核苷酸89

（二）离子交换层析分离氨基酸92

第五章凝胶层析技术95

一、基本原理95

二、常用于凝胶层析的凝胶种类98

三、凝胶层析操作101

（一）凝胶的选择和用量101

（二）凝胶的制备103

（三）凝胶柱的制备104

（四）装柱105

（五）凝胶柱平衡106

（六）上样107

（七）洗脱109

（八）样品的检测110

四、凝胶柱的保存、干燥和再生110

五、实验实例：凝胶层析法测蛋白质分子量112

第六章亲和层析技术116

一、基本原理116

二、载体及载体选择118

（一）载体118

（二）常用凝胶118

三、配基及配基的选择条件121

（一）常用配基122

（二）配基的选择123

（三）配基浓度125

（四）配基大小的选择126

四、载体活化与配基的偶联126

（一）载体对配基固相化的影响126

（二）载体的活化及配基偶联128

五、吸附和洗脱133

（一）影响吸附的因素133

（二）常用洗脱方法134

（三）亲和柱的再生135

六、实验实例：亲和层析法提纯胰蛋白酶135

第七章电泳技术140

一、基本原理140

二、影响电泳的几项因素143

（一）溶液的离子强度143

（二）电场强度144

（三）溶液的pH值145

（四）电渗现象145

三、电泳技术的分类及应用146

（一）滤纸电泳146

（二）琼脂和琼脂糖凝胶电泳148

（三）醋酸纤维素薄膜电泳148

（四）聚丙烯酰胺凝胶电泳149

四、实验实例158

（一）血清蛋白的醋酸纤维素薄膜电泳158

（二）聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白164

第八章酶的固定化技术172

一、固定化酶的主要制备方法172

（一）吸附法172

（二）包埋法175

（三）共价化学偶联法176

（四）直接交联固相法178

（五）固定化细胞法179

二、固定化酶的性质及应用180

（一）固定化酶的性质180

（二）固定化方法的选择及应用181

三、实验实例：糖化酶的固定化185

第九章离心技术191

一、离心分离的基本原理191

（一）沉降和离心191

（二）离心力和沉降速度192

二、离心技术的应用194

（一）离心机的类型和用途194

（二）制备超速离心技术197

三、实验实例：蔗糖密度梯度离心分离RNA混合物203

第十章几种生化产品的制备工艺209

一、胰岛素－胰酶联产工艺209

二、工业胰酶的制备工艺215

三、脑氨肽的制备工艺217

四、胆固醇的制备工艺219

五、胃膜素－胃蛋白酶联产工艺221

六、胸腺素的制备工艺224

七、人绒毛膜促性腺激素（HCG）的制备工艺227

八、溶菌酶的制备工艺231

九、肝素钠的制备工艺234

十、血红素的制备工艺241

十一、尿激酶的制备工艺243

十二、SOD的制备工艺249

十三、胱氨酸的制备工艺252

十四、植酸的生产工艺257

十五、植酸钙的生产工艺258

第十一章常规与临床检验实验260

一、蛋白质的颜色反应260

二、蛋白质的变性、沉淀、凝固反应268

三、酪蛋白的提取272

四、酪蛋白的等电点测定274

五、微量凯氏定氮法275

六、维生素C含量的测定282

七、酶的性质实验284

八、脂肪酸的β－氧化289

九、血尿素氮测定291

十、血乳酸测定294

十一、血尿酸测定297

十二、血清胆固醇测定299

十三、血红蛋白的定量测定301

十四、尿糖定性实验302

十五、尿肌酐测定303

十六、尿中酮体定性实验306