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第一章 形态学检查1

第一节 标本制备1

一 不染色标本的制备1

第一篇细菌学技术1

二 负染色标本的制备2

三 染色标本的制备2

三 染色法与染料的配制3

(二)革兰氏(Gram)染色法3

(一)简单染色法3

二 染料酒精饱合溶液的配制3

一 染料3

第二节 染色法与染料的配制3

(三)3%KOH法4

(四)萋纳(Ziehl-Neelsen)氏抗酸性细菌染色法5

(五)结核荧光染色法(Herrmann 改良法)5

(六)瑞氏(Wright)染色法5

(七)姬姆萨(Giemsa)氏染色法5

(八)细菌芽胞染色法6

(九)细菌鞭毛染色法6

(十)细菌荚膜染色法7

(十三)钩体镀银染色法(改良镀银法)8

(十一)乳酸酚棉蓝染色法8

(十二)方吞那(Fontana)染色法8

(十四)钩体媒染色法9

(十五)螺旋体负染色法9

(十六)马夏维洛(Macchiavello)染色法9

(十七)科兹洛夫斯基染色法9

(十八)牛乳的纽曼氏(Newman)染色法9

第三节 细菌的形态观察9

一 细菌的形状、排列、染色性9

二 细菌大小的测量10

三 细菌的细胞结构11

第四节 其它微生物形态13

一 真菌13

二 放线菌14

三 螺旋体14

四 霉形体15

五 立克次氏体16

六 衣原体16

七 病毒16

一 注意事项17

第一节 注意事项及获得纯培养的原则17

第二章 微生物的分离培养17

二 获得纯培养的原则18

三 正确分离方法的选用19

第二节 细菌的分离培养法19

一 通用的分离培养法19

(一)平板划线分离培养法19

(二)稀释平板分离培养法20

(二)平板划线法21

(四)厌氧环境的创造21

(三)稀释平板分离培养法21

(一)高层琼脂培养法21

二 厌氧菌的分离培养法21

(五)厌氧菌的培养23

第三节 细菌的纯培养与移植接种23

一 纯培养菌的挑选法23

二 纯培养菌的移植接种法23

第四节 其它微生物的分离技术24

一 病原真菌的分离24

二 枝原体的分离培养25

三 螺旋体的培养26

五 衣原体与立克次氏体的分离方法27

四 放线菌的分离方法27

第三章 纯培养菌的培养特性与生化特性检查法29

第一节 细菌培养特性检查法29

一 生长条件的检查29

二 生长表现的检查31

第二节 细菌的生化特性检查34

一 糖类代谢试验34

(一)糖发酵试验34

(二)葡萄糖代谢型测定或O/F试验34

(四)V-P试验35

(三)甲基红(MR)试验35

(五)淀粉水解试验36

(六)β半乳糖苷酶试验(ONPG试验)36

(七)甘油品红试验36

(八)七叶苷水解试验37

二 氨基酸蛋白质代谢试验37

(一)吲哚试验(靛基质试验)38

(二)硫化氢试验38

(三)尿素酶试验38

(四)明胶液化试验38

(七)精氨酸双水解酶试验39

(五)苯丙氨酸脱氨酶试验39

(六)氨基酸脱羧酶试验39

三 碳源与氮源利用试验40

(一)枸橼酸盐利用试验40

(二)马尿酸钠水解试验40

(三)有机酸盐利用试验40

(四)丙二酸钠利用试验41

(五)葡萄糖铵利用试验41

(六)醋酸钠利用试验41

(二)细胞色素氧化酶试验42

(三)触酶试验42

(一)氧化酶试验42

四 酶类试验和其它42

(四)过氧化物酶试验43

(五)硝酸盐还原试验43

(六)凝固酶试验44

(七)卵磷脂酶试验44

(八)磷酸酶试验45

(九)DNA酶试验45

(十)胆汁溶菌试验45

(十三)凝固血清液化试验46

(十二)美蓝还原试验46

(十一)石蕊牛乳试验46

(十四)氰化钾试验47

(十五)染料抑菌试验47

(十六)CAMP七叶苷试验47

第四章 其它技术49

第一节 细菌对抗菌素的敏感试验49

一 纸片扩散法(琼脂扩散法)49

二 稀释法53

一 平板计数法54

第二节 细菌的计数法54

三 联合药敏试验54

二 比浊法56

第三节 大肠菌群数的检查57

一 概念57

二 检查方法57

三 乳糖胆盐发酵培养基58

四 检索表58

第四节 细菌毒素的检查62

一 大肠杆菌肠毒素的检查62

三 肉毒梭菌毒素的检查64

二 葡萄球菌肠毒素的检查64

四 魏氏梭菌毒素的检查66

第五节 菌种保存69

一 继代保存法69

二 液体石腊覆盖保存法70

三 冷冻保存法71

四 冷冻干燥保存法71

第五章 常见病原细菌的分离与鉴定75

第一节 概述75

一 病料采取、保存与运送75

二 确认为传染病76

三 常见传染病检验时所用的病料78

四 临床诊断病料的一般检验程序82

五 细菌属的初步鉴定85

第二节 大肠埃希氏菌87

第三节 沙门氏菌属95

第四节 耶尔森氏菌属103

第五节 巴氏杆菌属108

第六节 嗜血杆菌属112

第七节 鼻疽假单胞菌115

第八节 铜绿色假单胞菌118

第九节 布氏杆菌属121

第十节 支气管败血波氏杆菌126

第十一节 葡萄球菌属129

第十二节 链球菌属131

第十三节 炭疽杆菌136

第十四节 梭菌属139

第十五节 猪丹毒杆菌146

第十六节 棒状杆菌148

第十七节 分枝杆菌150

第十八节 钩端螺旋体159

第十九节 密螺旋体163

第二十节 气单胞菌属165

第二十一节 放线杆菌与放线菌168

第二十二节 枝原体170

第二十三节 曲霉菌177

第二十四节 皮肤癣菌181

第二篇病毒学技术189

第六章 病毒的分离培养189

第一节 病料的采集与送检189

一 病料的采集189

二 病毒标本的运送和保存190

第二节 动物试验191

三 病料的处理191

一 实验动物的分类和选择192

二 实验动物的捕捉与保定194

三 实验动物的接种法196

四 实验动物的采血法197

五 实验动物的观察、解剖与病料采取199

第三节 鸡胚培养199

一 鸡胚培养实验用器械200

三 鸡胚的接种剖视和收获201

二 鸡胚的实验室孵育201

第四节 细胞培养205

一 器材处理205

二 人工营养液与平衡盐溶液206

三 原代细胞培养209

四 传代细胞培养212

五 细胞培养物病毒接种的方法与收获214

六 细胞的保存与运送216

七 细胞冻存与复苏的操作法217

一 物理提纯法218

第一节 病毒的提纯218

第七章 病毒的鉴定218

二 化学提纯法219

三 生物提纯法220

第二节 病毒的蚀斑技术与克隆221

一 培养瓶蚀斑技术221

二 微量细胞培养板蚀斑技术221

三 培养基与溶液的配制221

四 病毒的克隆222

第三节 病毒感染力的测定223

一 病毒核酸类型的鉴定224

第四节 病毒的理化特性224

二 病毒颗粒大小的测定225

三 对脂溶剂的敏感性226

四 对酸的敏感性227

五 耐热性试验227

六 浮密度值227

第五节 电子显微镜术228

一 负染色技术229

二 超薄切片法230

三 免疫电镜法231

第六节 核酸探针技术232

第七节 病毒致病特性检查234

第八章 常见病毒的分离与鉴定236

第一节 口蹄疫病毒237

第二节 狂犬病病毒243

第三节 流行性乙型脑炎病毒245

第四节 新城疫病毒249

第五节 传染性腔上囊炎病毒253

第六节 喉气管炎病毒255

第七节 禽传染性支气管炎病毒256

第八节 鸡马立克氏病病毒257

第九节 鸭瘟病毒259

第十节 鸭肝炎病毒261

第十一节 小鹅瘟病毒262

第十二节 猪瘟病毒264

第十三节 猪传染性胃肠炎病毒266

第十四节 猪细小病毒269

第十五节 轮状病毒270

第十六节 牛传染性鼻气管炎病毒273

第十七节 牛腹泻-粘膜病病毒274

第十八节 犬瘟热病毒278

第十九节 犬细小病毒279

第二十节 猫泛白细胞减少病毒280

第二十一节 兔出血症病毒282

第三篇免疫学技术285

第九章 抗原抗体的制备285

第一节 抗原的制备285

一 细菌抗原的制备285

第二节 抗体的制备287

一 抗血清的制备287

三 免疫用抗原的制备287

二 病毒抗原的制备287

二 免疫球蛋白的分离与提纯289

三 抗抗体(第二抗体)的制备295

四 单克隆抗体的制备296

第三节 佐剂298

一 佐剂及其作用298

二 佐剂的种类299

第十章 凝聚性抗原抗体反应301

第一节 凝集反应301

一 直接凝集反应301

二 间接凝集反应303

三 协同凝集反应307

一 环状沉淀反应308

第二节 沉淀反应308

二 双向单扩散(辐射扩散)309

三 双向双扩散试验(Ouchterlong法)310

四 免疫电泳311

五 对流免疫电泳313

六 火箭免疫电泳314

七 聚丙烯酰胺凝胶电泳314

八 转移电泳320

一 基本原理322

二 荧光抗体的制备322

第十一章 免疫标记抗体技术322

第一节 免疫荧光抗体技术322

三 荧光抗体染色方法328

四 荧光显微镜观察331

第二节 免疫酶标记技术332

一 免疫酶标记技术的原理332

二 免疫酶标记抗体的制备332

三 免疫酶染色技术337

四 酶联免疫吸附测定(ELISA)339

五 斑点一酶联免疫吸附测定(Dot-ELISA)343

第三节 放射免疫分析344

一 放射性同位素的选择344

二 放射性同位素的体内标记法344

三 放射性同位素的体外标记法345

四 液相放射免疫分析347

五 固相放射免疫分析349

六 免疫沉淀试验350

七 放射火箭电泳自显影定量测定法351

一 免疫复合物电镜技术352

第四节 免疫电镜技术352

二 免疫标记电镜技术353

第五节 其它标记技术356

第十二章 有补体参与的反应359

第一节 补体结合反应359

一 原理359

二 材料与方法359

三 准备实验360

四 正式试验363

五 标准比色管364

附一、病毒的补体结合反应(测抗体)365

六 记录符号365

附二、病毒的补体结合反应(测抗原)368

第二节 溶血与溶菌试验368

一 被动溶血试验368

二 溶菌试验369

第三节 单向辐射溶血试验369

一 材料369

二 方法369

第一节 病毒滴度(毒价)的测定371

一 Reed-Muech氏法371

第十三章 中和试验371

二 Karber法373

第二节 终点法中和试验374

一 固定病毒稀释血清法374

二 固定血清稀释病毒法375

第三节 空斑减少试验375

第十四章 细胞免疫检测技术377

第一节 玫瑰花环试验377

一 E玫瑰花环试验377

二 EA玫瑰花环试验378

三 EAC玫瑰花环试验379

二 材料380

第二节 酸性α-醋酸萘酯酶测定380

一 原理380

三 试验方法381

四 结果判断381

第三节 淋巴细胞转化试验381

一 PHA淋转试验形态学检查法381

二 PHA淋转试验3HTdR掺入法383

附录：386

一仪器设备386

(一)细菌用玻璃器皿的准备399

二 微生物学实验用玻璃器皿的准备399

(二)组织培养用玻璃器皿准备401

(三)橡胶制品的准备402

(一)制造人工培养基的要求402

(二)制造培养基的步骤与方法402

三 培养基的制造403

(三)基础培养基404

四 指示剂配制405

五 常用缓冲液的配制406

六 常用元素的原子量410

七 常量、微量、超微量度量衡单位410