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目 录1

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第一章 基因工程的理论依据与发生发展1

一、分子生物学与基因工程(Genetic Engineering)的概念和意义2

二、基因工程诞生的历史背景3

三、基因工程的理论依据和技术特点4

四、基因工程的研究成就与展望13

五、诺贝尔奖(Nobel Prize)与分子生物学19

第二章 基因工程实验室的装备21

一、实验室的基本要求22

二、水的净化装置22

三、离心机实验室22

四、电泳技术(Electrophoresis)25

五、层析技术(Chromatography)28

六、DNA合成仪29

七、DNA测序仪29

八、PCR仪30

九、核素实验室30

十、细胞培养室30

十一、其他32

第三章 核酸的结构、功能与纯化33

一、核酸的种类、结构、分布与功能概述34

二、DNA、基因与染色体的分子解剖学34

三、核仁、核糖体与RNA39

四、DNA的纯化、浓缩、沉淀、定量、贮存45

第四章 DNA的复制、修复与分离、提取48

一、DNA的复制—半保留复制(Semiconservative Replication)49

二、DNA的损伤与修复58

三、逆转录(ReverseTranscription)60

四、核酸的分离提取62

五、从全血中提取白细胞DNA62

六、真核细胞染色体DNA的制备63

七、质粒和噬菌体DNA的提取与纯化64

八、DNA片段的分离与纯化66

九、真核细胞RNA的分离与纯化67

十、mRNA的分离与纯化68

十一、核酸的快速分离与纯化68

第五章 基因克隆技术71

一、概述73

二、基因克隆(Gene Cloning)的概念73

三、制备目的基因74

四、DNA的切断与连接—DNA限制性内切酶(Restriction Enzymes)76

五、目的基因和载体连接,制成DNA重组体79

六、将DNA重组体导入宿主细胞88

七、DNA重组体的筛选与鉴定90

八、基因克隆的应用92

九、基因组文库(genomic library)的构建93

十、eDNA文库的构建94

第六章 DNA的变性复性与聚合酶链反应(PCR)95

一、DNA的变性与复性97

二、PCR技术的概念与意义98

三、PCR的基本原理和标准条件99

四、PCR反应模板的准备100

五、PCR反应引物设计102

六、耐热DNA多聚酶(Taq DNA polymerase)102

八、 PCR反应条件的选择与自动化操作103

七、PCR反应缓冲液及核苷酸底物103

九、PCR扩增产物的分析与鉴定104

十、预防假阳性与假阴性—PCR污染问题105

十一、PCR技术的种类与发展105

十二、PCR技术的应用111

第七章 核酸分子探针的标记116

一、核酸探针与分子杂交的概念117

二、核酸分子探针的种类、特性及其制备方法117

三、标记物的种类及其特性119

四、各种标记方法及其选择121

五、标记探针的结合率、产量及比放射活性的测定131

六、标记探针的纯化131

第八章 核酸分子杂交技术132

二、固相液相杂交亦称膜上印迹杂交133

一、概念133

三、核酸原位杂交技术142

第九章DNA序列测定149

一、概述150

二、Maxam-Gilbert化学降解法151

三、Sanger的酶法152

四、利用PCR及银染法测序163

五、杂交测序(SBH)和套式链杂交测序(SNSH)163

六、RNA序列测定164

七、DNA序列的计算机处理165

第十章DNA的人工化学合成168

一、概述169

二、DNA的酶促合成170

三、DNA化学合成原理171

四、DNA的合成方法、纯化及鉴定176

五、DNA化学合成的应用178

第十一章 原核与真核基因表达181

一、概述182

二、基因的转录与转录后加工182

三、基因的翻译或蛋白质的生物合成190

四、外源基因在原核细胞中的表达195

五、外源细胞基因在真核细胞中的表达201

第十二章 转基因动物204

一、概述205

二、建立转基因动物的方法205

三、转基因鼠系的建立与鉴定212

四、转基因动物的应用213

第十三章 基因工程抗体技术216

二、嵌合抗体的制备217

一、概述217

三、小分子抗体的制备223

四、噬菌体抗体库技术(Phage antibody library technique)226

第十四章 基因诊断技术234

一、基因诊断的概念与特点235

二、基因诊断的理论基础与内容236

三、基因诊断的方法238

四、基因诊断在临床医学中的应用242

第十五章 人类疾病的基因治疗技术250

一、概述251

二、基因转入的方法253

三、基因治疗方法的设计257

四、遗传病的基因治疗259

五、肿瘤的基因治疗261

六、病毒性感染的基因治疗263

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