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Ⅰ、植物基因处理方法1

第一章DNA的抽提方法3

1.1 核DNA3

1.1.1 花椰菜总DNA的抽提3

1.1.2 从菠菜叶片抽提核DNA6

1.2 叶绿体DNA9

1.2.1 叶绿体的分离9

1.2.2 叶绿体DNA的抽提12

1.3 线粒体DNA——甜菜线粒体DNA的抽提15

1.4 病毒DNA的抽提方法18

1.4.1 从精制病毒粒子中抽提DNA18

1.4.2 从感染叶片直接抽提病毒DNA的方法23

2.1 限制酶25

第二章 基因的检测25

2.2 凝胶电泳26

2.3 Southern转移杂交27

2.3.1 Southern转移27

2.3.2 用RNA作探针的杂交30

2.3.3 用DNA作探针的杂交32

第三章 使用cDNA进行克隆35

3.1 mRNA的制备35

3.1.1 用SDS-酚法抽提总RNA35

3.1.2 poly（A）＋RNA的分离37

3.2 无细胞蛋白质合成39

3.2.1 麦胚抽提液的制备39

3.2.2 翻译反应41

3.3 用质粒载体建立cDNA库43

3.3.1 单链cDNA的合成与模板mRNA的碱水解45

3.3.2 在单链cDNA的3′OH末端加上dC的同聚物47

3.3.3 双链cDNA的制成48

3.3.4 对双链cDNA末端加工以插入质粒50

3.3.5 与pstI切口3′末端加有oligodG的pBR322退火51

3.3.6 转化52

3.3.7 cDNA克隆的筛选53

第四章 用Charon30进行克隆——基因组DNA的基因库58

4.1 包装抽提液的制备58

4.2 Charon30载体DNA及基因组DNA片段的制备61

4.3 包装与基因库的扩增62

第五章 特定基因的克隆65

5.1 rRNA基因65

5.1.1 制备含有蚕豆rDNA的EcoRI片段的DNA组分66

5.1.2 pBR325的EcoRI酶解与碱性磷酸酯酶处理67

5.1.3 蚕豆核DNA的EcoRI片段与载体的结合68

5.1.4 大肠杆菌的转化69

5.1.5 用菌落杂交法选择带有rDNA片段的重组子70

5.2 tRNA基因72

5.2.1 tRNA基因的克隆72

5.2.2 tRNA基因的确定74

5.3 重复性DNA76

5.3.1 蚕豆核DNA用BamHI处理形成片段后，通过琼脂糖凝胶电泳分离重复序列并从胶中进行回收76

5.3.2 蚕豆核DNA的BamHI重复序列与pBR322的结合，以及对大肠杆菌HB的转化77

5.3.3 重组质粒中含有重复序列的验证78

5.3.4 用2种限制酶浓缩重复DNA序列（蚕豆）FokI重复序列的例子79

5.4 叶绿体蛋白质81

5.4.1 转录起点和终点的决定：S1作图法81

5.4.2 转录产物的检测：Northern杂交84

5.5 植物ars86

5.5.1 酵母的转化87

5.5.2 从酵母转化子中抽提总DNA90

5.6 大豆球蛋白A3B4中间亚基cDNA的克隆93

第六章 RNA病毒及类病毒的克隆99

6.1 TMV（普通株）的制备99

6.2 TMV-RNA的制备100

6.3 HSV的纯化101

6.4 TMV-RNA上添加poly（A）103

6.5 HSV上添加poly（A）104

6.6 用冈山—Berg法克隆HSVcDNA105

6.6.1 用载体引物合成cDNA106

6.6.4 用DNA连接物环化107

6.6.3 用HindⅢ切断107

6.6.2 加上oligodC链107

6.6.5 用缺口转移将RNA链换成DNA链108

6.6.6 转化108

6.7 TMVcDNA的克隆109

6.7.1 TMVcDNA的合成110

6.7.2 用碱性蔗糖密度梯度离心分级cDNA111

6.7.3 cDNA上添加oligodC111

6.7.4 用载体引物合成双链DNA111

6.7.5 用连接酶将DNA环化和转化112

第七章 Ti质粒的检测及制备113

7.1 Ti质粒的检测方法113

7.2 Ti质粒的制备方法115

8.1 酶法119

8.1.1 待测DNA的克隆119

第八章 DNA碱基顺序测定法119

8.1.2 单链DNA的制备122

8.1.3 聚合酶反应124

8.2 化学法（Maxam—Gilbert）127

8.2.1 DNA5′端标记127

8.2.2 标记DNA片段用丙烯酰胺凝胶电泳进行分离129

8.2.3 碱基专一性反应131

8.2.4 应用凝胶电泳确定碱基顺序134

第九章 RNA碱基顺序测定法137

第十章 应用DABITC方法测定蛋白质的一级结构142

Ⅱ、细胞融合149

第十一章融合方法及杂种的形成149

11.1 PEG-Ca法149

11.2 葡聚糖法152

11.3 烟草属杂种的育成154

第十二章 形成变异的方法157

12.1 铝抗性植株的育种157

12.2 营养缺陷型变异株的形成163

12.2.1 用诱变剂处理原生质体163

12.2.2 营养缺陷型植株的鉴定165

第十三章 杂种的鉴定方法168

13.1 组分Ⅰ蛋白168

13.1.1 烟草组分Ⅰ蛋白的结晶及其抗体的制备168

13.1.2 组分Ⅰ蛋白样品的制备170

13.1.3 等电聚焦电泳172

13.1.4 组分Ⅰ蛋白的Western转移法174

13.2 核糖体RNA基因（rDNA）176

13.3 染色体原位杂交法178

本书所用缩写或简称183