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实验一碱法抽提质粒DNA5

一、实验目的5

二、实验原理5

（一）克隆载体pUC118质粒与宿主菌MV11847

（二）质粒DNA的抽提10

（三）碱法抽提的主要试剂19

（四）抽提产量与试剂用量的估算19

三、试剂与器材21

四、实验步骤24

实验二电泳法测定DNA的浓度与纯度27

一、实验目的27

二、实验原理27

（一）琼脂糖凝胶29

（二）电泳时DNA迁移的影响因素31

（三）电泳缓冲液35

（四）上样液36

（五）上样量的控制37

（六）DNA电泳条带的检测38

（七）电泳的分子质量梯度标志40

三、试剂与器材43

四、实验步骤44

实验三载体与供体DNA的酶切46

一、实验目的46

二、实验原理46

（一）限制性内切酶的一般性质48

（二）限制性内切酶的使用54

（三）酶切方式55

（四）酶的质量鉴定56

（五）酶的保存57

（七）限制酶的作用条件58

（六）酶单位的定义58

（八）终止酶反应的方法61

（九）酶切失败的原因及处理的方法61

三、试剂与器材63

四、实验步骤63

实验四目的基因片段的回收65

一、实验目的65

二、实验原理65

（一）各类回收方法66

（二）回收方法的选择与操作注意事项72

三、试剂与器材73

四、实验步骤74

实验五载体与供体DNA的连接77

一、实验目的77

二、实验原理77

（一）早期的连接理论78

（二）近期的计算机模拟反应进程79

（三）连接酶88

（四）连接反应的影响因素89

（五）三种连接酶单位定义92

三、试剂与器材93

四、实验步骤93

实验六CaCl2法转化大肠杆菌95

一、实验目的95

二、实验原理95

（一）各种转化方法与转化率的衡量指标96

（二）转化率的影响因素98

（三）大肠杆菌中的限制系统与限制-修饰系统104

（四）宿主菌的选择106

三、试剂与器材107

四、实验步骤108

二、实验原理111

实验七酚／氯仿法快速鉴定转化子111

一、实验目的111

（一）DNA水平检测112

（二）mRNA水平检测113

（三）蛋白质水平检测115

（四）功能水平检测115

三、试剂与器材116

四、实验步骤117

实验八随机引物法标记DNA探针120

一、实验目的120

二、实验原理120

（一）酶法标记于链上122

（二）酶法标记于末端124

（三）化学法标记于链上128

（四）化学法标记于末端137

（五）光化学法标记于链上140

（六）人工合成于链上142

（七）检测酶直接标记法144

三、试剂与器材151

四、实验步骤151

实验九菌落原位吸印153

一、实验目的153

二、实验原理153

（一）各类吸印膜153

（二）各种转移方法156

三、试剂与器材158

四、实验步骤159

实验十DNA分子杂交161

一、实验目的161

二、实验原理161

（一）DNA的复性与杂交反应动力学方程式162

（二）杂交速率的影响因素169

（三）杂交反应的两种模式172

（四）杂交分子稳定性的影响173

（五）杂交的步骤175

三、试剂与器材176

四、实验步骤177

实验十一显色法检测杂交结果179

一、实验目的179

二、实验原理179

（一）酶法显色原理181

（二）免疫法检测原理189

（三）生物素-亲和素法检测原理189

（四）其他检测法190

三、试剂与器材193

四、实验步骤195

实验十二PCR法鉴定人的性别197

一、实验目的197

二、实验原理197

（一）PCR的引物设计199

（二）PCR的反应体系202

（三）PCR循环中的影响因素208

（四）平台效应的形成因素210

（五）热启动技术211

（六）PCR反应的忠实性212

（七）污染的防治214

（八）人的性别鉴定215

三、试剂与器材216

四、实验步骤216

附录219

参考文献289