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第一章导论1

一、基因工程的诞生及其研究内容1

（一）基因工程的诞生1

（三）Ⅰ型核酸内切限制酶的基本特征 22

（二）基因工程研究的内容3

二、基因操作的基本技术5

（一）凝胶电泳5

（二）核酸分子杂交8

（三）细菌转化11

三、基因工程的成就与展望13

（一）寄主控制的限制与修饰现象和内切酶的发现16

一、限制性核酸内切酶与DNA分子的切割16

第二章基因操作的工具酶16

（二）限制性核酸内切酶的分类和命名18

（四）内切酶限制消化反应条件26

二、连接酶和DNA分子的连接29

（一）DNA连接酶29

（二）DNA片段的连接31

三、DNA聚合酶34

（一）大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ35

（二）大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的K1enlow片段与DNA末端标记37

（三）T4DNA聚合酶39

（四）逆转录酶39

（一）核酸酶？？40

四、DNA和RNA的修饰酶40

（二）末端脱氧核苷酰转移酶41

（三）外核酸酶Ⅲ41

（四）外核酸酶Ba13142

（五）T4多核苷酸激酶42

（六）碱性磷酸化酶43

第三章基因克隆载体45

一、质粒载体45

（一）质粒的一般生物学特性45

（二）质粒载体的选择49

（三）大肠杆菌质粒载体51

二、噬菌体载体56

（一）噬菌体的一般生物学特性57

（二）λ噬菌体载体59

（三）柯斯质粒载体67

（四）单链DNA噬菌体载体71

三、真核细胞的克隆载体73

（一）在酵母细胞中克隆基因常用的载体78

（二）值物基因克隆的载体——Ti质粒80

（三）动物细胞基因克隆的载体83

四、各级载体的简表87

第四章基因分离与重组及重组体向缩主细胞的导入88

一、目的基因的获得89

（一）化学合成基因89

（二）基因文库的构建及基因分离92

（三）从真核生物分离纯化目的基因的一般方法——逆转录法95

二、重组体的构建100

（一）质粒DNA的分离纯化100

（二）目的基因与载体的连接100

三、重组体向宿主细胞的导入104

（一）重组体DNA分子的转化或转染105

（二）重组体的体外包装及λ噬菌体的转导107

第五章重组体克隆的筛选与鉴定109

一、利用表型特征筛选110

（一）利用载体提供的表型特征筛选重组体分子110

（二）利用插入序列提供的表型特征筛选115

（三）利用噬菌斑形成筛选117

二、利用核酸杂交筛选117

（一）原位杂交筛选过程118

（二）核酸杂交检测的探针119

三、利用免疫学方法筛选120

（一）放射性抗体检测法122

（二）免疫沉淀检测法124

四、转译筛选法125

（一）阻断转译杂交法126

（二）杂交释放转译法127

五、物理筛选法128

（一）电泳法筛选128

（二）R—环检测法129

第六章克隆基因的表达130

（一）有效转录131

一、基因表达的基本条件131

（二）正确转译137

二、启动子的性质及克隆基因的高效表达138

（一）启动子的性质138

（二）常用于表达载体的启动子140

（三）提高克隆基因表达效率的途径141

三、原核有效表达载体的构建146

（一）只带E.coli启动子的最简单表达载体148

（二）启动子的选择148

（三）转录表达载体的应用149

（四）大肠杆菌生产重组蛋白的共同问题157

（一）胰岛素基因在大肠杆菌细胞中的表达158

四、真核基因在原核生物中表达的实现158

（二）生长激素释放抑制因子基因在大肠杆菌中的表达162

第七章基因工程在生物学研究中的应用165

一、怎样研究克隆的基因165

（一）基因定位165

（二）基因序列分析173

（三）基因表达的调控182

二、基因工程在生物学研究中的应用191

（一）线粒体基因研究191

（二）叶绿体基因工程研究195

（三）种子储藏物质的生物合成200

（四）基因克隆的未来展望202

主要参考书目202