《Tab.1 Sequence of primers》

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《"1,10-邻二氮杂菲双过氧钒酸钾对HT22细胞增殖和周期的影响"》


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将HT22细胞接种于6孔细胞培养板中进行培养,分为3组,每组3个重复孔,分别为DMSO对照组、BPV(phen)0.3和3.0μmol·L-1组,处理24 h,细胞用PBS清洗,然后将放射免疫沉淀缓冲液(RIPA)加入细胞中置于冰上裂解10 min,采用BCA法测定蛋白含量,蛋白质通过10%SDS-PAGE进行电泳分离并电转印到硝化纤维素膜上,用5%脱脂牛奶封闭液进行封闭室温孵育1 h,再用1×TBST洗膜。分别加入目的蛋白对应的一抗[DNMT3A(1∶1000)、DNMT3B(1∶1000)及β肌动蛋白(1∶2000)、DNMT1(1∶1000)和P21(1∶1000)]4℃摇床孵育过夜。去除一抗并清洗,加入山羊抗小鼠(1∶1000)和驴抗兔(1∶1000)二抗室温振荡孵育2 h。用电化学发光检测系统检测蛋白信号,利用Image J软件测定蛋白条带积分吸光度值,用目标蛋白与内标蛋白条带积分吸光度值比值表示蛋白的相对表达量。