《表1 sgRNA序列：SETD8~(–/–)抑制人胚胎干细胞向造血分化》

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《SETD8~(–/–)抑制人胚胎干细胞向造血分化》

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利用CRISPR/Cas9设计工具（http://crispr.mit.edu），针对SETD8基因编码区域Exon1和Exon2分别设计特异性sg RNA。选取2条评分较高的sg RNA，并在sg RNA的5′端前添加CACC，互补链前加5′端添加AAAC，最终分别合成四条寡合苷酸链（表1）。两条寡核苷酸链退火形成的双链可与Bmsb1酶切后形成的黏性末端互补。退火方法:分别取1μL上游链和1μL下游链（浓度100μmol/L），加8μL的水混合终浓度为10μmol/L，95°C 5 min，之后以5°C/min的速率降温至25°C。