《表1 引物序列：27nt-miRNA对间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化的影响》

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《27nt-miRNA对间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化的影响》

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分化第14天时，收集3组细胞样本，根据TRIzol试剂盒说明书提取各组细胞的总RNA，利用Primer Premier 5.0软件设计合成SMA、SM22α和GAPDH的引物，见表1。分别取各组细胞RNA1μg，加入1μL（0.5 g/L）Oligo（dT）18 Primer，70℃变性5 min后立即放置冰上冷却。加4μL反应缓冲液（5×），1μL Ribo LockTM Ribonuclease Inhibitor（20 U/μL），2μL 10 mmol/L dNTP Mix，37℃温育5 min，加入1μL逆转录酶，42℃反应1 h，之后70℃孵育10 min终止反应，得到cDNA第一条链。PCR扩增反应:94℃预变性5 min后，开始30个循环（94℃30 s、56℃1 min、72℃1 min），最后72℃5 min，终止反应。取5μL PCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳分析。