《表2 农杆菌侵染浓度对抗性芽苗分化的影响》

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《油菜农杆菌介导转化体系的优化》

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通过对油菜农杆菌转化后外植体生长发育的观察发现，造成油菜基因转化中转化率低的主要原因是在油菜外植体经过农杆菌侵染和与农杆菌共培养后外植体上会出现严重的褐化现象。而且外植体褐化的程度与农杆菌侵染时农杆菌菌液浓度有关。在农杆菌侵染时间为5 min时，用不同浓度的农杆菌菌液转化后，外植体的出愈率和抗性芽苗的分化率列于表2。由表2可知，农杆菌菌液浓度对转化率有显著影响，当农杆菌菌液OD600为1.0时，子叶外植体的出愈率和抗性芽苗的分化率分别比菌液OD600为0.4时下降34.69，15.38百分点；下胚轴外植体的出愈率和抗性芽苗的分化率分别比菌液OD600为0.4时下降26.15，13.39百分点。从图3-C可以看出，过高和过低的菌液浓度都不利于获得高转化效率，在本试验中，无论子叶还是下胚轴，芽苗的最大分化率均是在农杆菌菌液OD600为0.4时得到的，此时子叶和下胚轴的分化率分别为23.00%和18.95%。因此，在农杆菌介导的油菜基因转化中，当侵染时间为5 min时，最佳的农杆菌菌液OD600为0.4。