《表1 4种农杆菌侵染方案》

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《基因枪介导的老芒麦遗传转化体系的建立》

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用热激法（Mann et al.，2012）将PANIC6A/6D/6E （图1A–C）分别转化根癌农杆菌EHA105 （本研究所用农杆菌和大肠杆菌菌株由中国科学院青岛生物能源与过程研究所能源与作物分子育种团队提供），涂板约48小时后，挑取单克隆接种到添加50 mg·L–1卡那霉素和50 mg·L–1利福平的600μL LB培养液中，于28°C、每分钟200转的摇床中摇菌约14小时。菌液检测呈阳性后，取200μL菌液加入含有50 mg·L–1卡那霉素和50 mg·L–1利福平的50 mL LB培养液中，于28°C、每分钟200转的摇床中摇至OD600=0.4，然后加入乙酰丁香酮（AS）至终浓度为100μmol·L–1。继续摇约2小时至OD600=0.6时，851×g离心15分钟收集菌体。用侵染液（未加琼脂的继代培养基）重悬菌体，至终浓度OD600=0.3，乙酰丁香酮浓度为100μmol·L–1时开始侵染。侵染受体为结构致密且状态较一致的川草2号老芒麦幼穗愈伤组织（约培养30天）和幼穗。农杆菌侵染方法参照Wang和Ge （2005）的方法并进行改动，4种侵染方案具体见表1。