《表2 酶催化转化Re生成Rg1反应条件》

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《二步法制备稀有人参皂苷Rh1组异构体》

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底物Re的配制:取1 mg Re对照品加入到200μL无水乙醇和800μL p H5.0醋酸钠-醋酸缓冲液中完全溶解，取1 m L底物Re溶液加入1 m L酶液进行酶反应。对Absidia sp.P39r菌产酶液催化转化Re的最佳反应条件进行确定（表2），固定反应条件为:反应温度40℃，底物浓度1 mg/m L，乙醇浓度10%，反应时间20 h，考察不同缓冲液pH（3.4、3.8、4.2、4.6、5.0、5.4、5.8、6.2）对产物中Rg1质量分数的影响；固定反应条件为:缓冲液p H5.0，底物浓度1 mg/m L，乙醇浓度10%，反应时间20 h，考察不同反应温度（25、30、35、40、45、50、55、60℃）对产物中Rg1质量分数的影响；固定反应条件为:缓冲液pH5.0，反应温度40℃，乙醇浓度10%，反应时间20 h，考察不同底物浓度（0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0 mg/m L）对产物中Rg1质量分数的影响；固定反应条件为:缓冲液pH5.0，反应温度40℃，底物浓度1 mg/m L，反应时间20 h，考察不同乙醇浓度（0、2%、4%、6%、8%、10%、12%、14%、16%、18%、20%）对产物中Rg1质量分数的影响；固定反应条件为:缓冲液pH5.0，反应温度40℃，底物浓度1 mg/m L，乙醇浓度10%，考察不同反应时间（6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26 h）对产物中Rg1质量分数的影响。进行单因素实验，分别对每个反应取样，加入2 BV水饱和正丁醇终止酶反应，振荡，分层，吸走下层液体，将上层液体蒸干得到粉末样品。粉末样品用色谱纯甲醇溶解，通过HPLC-PDA检测分析，根据催化反应得到的Rg1的质量分数来确定最佳反应条件。