《表1 多重PCR扩增体系》

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《316例患者呼吸道病原体多重实时荧光PCR检测及分析》

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分A、B两管多重PCR反应液对表1中六种呼吸道病原体同时进行检测，其中A、B两管反应液含有内标监控（如表1所示），通过检测标本中编码甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）的管家基因的mRNA是否正常扩增来监测待测标本采集和提取过程以及PCR扩增过程，避免假阴性结果。PCR扩增和检测:标本提取核酸后，每管反应液取5μL核酸进行检测，使用ABI7500进行扩增；扩增程序为:50℃逆转录30分钟；95℃预变性1分钟；95℃预变性15秒、60℃退火和延伸30秒，同时采集荧光信号，45个循环；25℃仪器冷却10秒。