《表1 扩增PRRSV SD53不同长度GP4基因的引物》

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《美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒GP4蛋白中和活性单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定》

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已报道的PRRSV GP4蛋白最长的表位含有11个氨基酸[6]，将包含最长表位的GP4分成部分重叠的GP4-1、GP4-2和GP4-3 3个片段（表1），各片段均经Bam HⅠ和XhoⅠ酶切后克隆于p GEX-6p-1载体中。含有p GEX-GP4-1/2/3的重组菌Rosetta（DE3）经IPTG诱导后裂解，以MAb腹水（1∶10 000）为一抗，Dy Light 800TM标记羊抗鼠Ig G（1∶10 000）为二抗，western blot鉴定MAb识别的片段，将识别的阳性片段再逐步截短表达，直到筛选到最小的抗原表位。