《表1 引物列表:花器官发育B类基因AP3同源基因在几种葫芦科植物单性花发育过程中的作用研究》

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《花器官发育B类基因AP3同源基因在几种葫芦科植物单性花发育过程中的作用研究》


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注:粗体字标明软件预测的MADS家族蛋白结合序列。

合成单链DNA探针后,根据3′生物素标记试剂盒(Thermo#89818)说明书步骤将生物素标记加在探针3′端。将互补单链探针退火得到含有生物素标记的双链DNA探针。未加生物素标记的互补单链探针退火作为竞争抑制探针。退火步骤为将互补单链探针溶于TEN缓冲液(10 mmol·L-1 Tris base,1 mmol·L-1 EDTA,50 mmol·L-1 NaCl,pH 8.0),摩尔比混合后,放于浮漂上,静置于沸水中,直至沸水冷却至25℃。根据凝胶阻滞实验试剂盒(Light Shift Chemiluminescent EMSA Kit,Thermo#20148)使用手册进行EMSA试验。蛋白和探针于室温结合反应30 min,后续流程按试剂盒说明书进行。使用的探针DNA序列列于表1。