《表1 引物序列：大白菜黄化突变基因Bra024218表达模式分析》

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《大白菜黄化突变基因Bra024218表达模式分析》

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将突变基因Bra024218的全长编码区序列用PCR扩增（引物序列见表1），利用BsaI/E-co31I对载体p BWA（V）HS-Bra024218-GLosgfp进行酶切反应，利用BsmBI/Esp3I对cDNA进行酶切反应，将载体酶切物和回收片段酶切产物用纯化试剂盒纯化，用T4-ligase进行连接反应。将5～10μL连接产物转化大肠杆菌TOP10感受态，转化涂（卡那霉素）抗性平皿，37℃培养12h，进行菌斑PCR鉴定。目标条带为1000bp左右的片段。选1～3个阳性条带对应的菌液，取100μL送样测序，其余400μL菌液接种到含有5～10mL（卡那霉素）抗性LB中，试管摇菌，待测序结果出来后，对应测序正确的取一管提取质粒。将提取的质粒用EcorV酶切，进行酶切验证。