《表1 菌株, 质粒和引物》

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《木糖酸氧化途径在枯草芽孢杆菌的构建及转化乙醇酸的研究》

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以大肠杆菌E.coli W3110为模板，以引物对YjhGeco-F和YjhGeco-R进行高保真PCR得到目标yjhG基因产物，以引物对YjhHeco-F和YjhGeco-R进行高保真PCR得到目标yjhH-yjhG双基因产物（引物序列见表1），将得到的PCR产物进行清洁并测定浓度。用Bam H I快切酶将质粒pMK4-PxylA-comK线性化并切除comK DNA片段[11]，在37℃中反应3 h后加入1μL碱性磷酸酶，继续反应1 h后进行清洁并测定浓度。将清洁后的质粒和片段通过一步克隆试剂盒进行连接，之后立即进行转化，转化子经colony PCR验证后，提取质粒DNA，通过DNA测序验证了质粒构建的正确性。